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肌腱粘连与移植材料有关,尤其与肌腱表面有无滑膜及滑膜囊的完整性有关。滑膜肌腱在抗粘连方面明显优于无滑膜肌腱,但由于有滑膜肌腱结构的特殊性,取材对局部如腱鞘破坏较大,会造成新的残指(趾),其移植材料的来源受到临床应用的限制。受到在皮下埋置硅胶材料可在局部形成滑膜组织结构的启发,设计了无滑膜肌腱在体滑膜化动物实验研究。首先,在动物(兔)皮下手术埋置硅胶囊扩张器,经过不同时间充气和有规律的按摩刺激,使局部形成滑膜样包裹结构,从而构建人工皮下滑膜囊模型,通过大体观察、组织学结构、超微结构、免疫组化以及UDPGD功能性酶活性的检测、滑囊液HA浓度检测等指标,对滑膜囊结构和功能进行研究,探讨其形成的可能性。其次,取动物自体腓骨长肌肌腱段(无滑膜肌腱),游离放进已经形成的皮下滑囊腔内,进行肌腱组织的“在体培养”和滑膜化改造,对培养前后,肌腱组织结构和表面形态变化进行观察,判断肌腱是否被滑膜化。然后,将经过培养改造的滑膜化肌腱作为移植材料,进行屈指肌腱鞘内移植动物实验,观察其愈合情况,对移植肌腱抗粘连效果进行评估,并与未经滑膜化改造的无滑膜肌腱移植实验进行比较。另外,为了探讨肌腱滑膜化的细胞机制,本实验还对人胚肌腱细胞和滑膜细胞进行体外分离和培养,观察细胞生长情况,对培养细胞进行表型鉴定。然后以不同浓度的牛关节滑液,作用于人胚肌腱细胞,用BrdU掺入的方法标记S期细胞,观察肌腱细胞增殖情况,对细胞表达Ⅰ型胶原或CD68和VCAM-1的情况,进行免疫荧光检测,以判断细胞表型是否发生变化。实验结果如下:1. 动物皮下滑膜囊模型的构建将硅胶囊埋置动物皮下2周,取出硅胶囊的部位形成“滑膜囊”样的结构改变,囊腔内表面光滑,滑囊壁由大量胶原纤维和少量细胞构成内表面游离的膜状结构,囊壁细胞具有CD68和VCAM-1阳性以及UDPGD高活性反应的表现,提示这些细胞具有合成HA的旺盛功能。囊内有滑液样液体,清亮、透明、稍粘稠,经离心涂片检验,没有发现细胞成分。滑囊液中HA浓度高于血清水平,统计学相差显著。扫描电镜观察,囊壁内表面有微绒毛结构,透射电镜见囊壁表层细胞具有滑膜A、B型细胞的超微结构特点。2. 无滑膜肌腱在体滑膜化将无滑膜肌腱段在人工构建的皮下滑囊腔内“在体培养”1周,其肌腱外表面形成光滑的膜样结构。超微结构显示滑膜化肌腱表面光滑,无纤维裸露。膜上分布有微孔样<WP=10>结构,与肌腱深层相通。在滑膜化肌腱表层结构中,观察到具有滑膜A、B型细胞超微结构特点的巨噬样细胞和成纤维样细胞。细胞UDPGD酶活性高表达,并可见VCAM-1和CD68阳性细胞。3. 滑膜化肌腱鞘内移植动物实验。在人工构建的动物皮下滑囊腔内“在体培养”后,将完成滑膜化改造的滑膜化肌腱,与屈趾肌腱腱鞘内的有滑膜肌腱相移植,其移植材料与受区愈合良好,移植腱内部无坏死,肌腱吻合口处与腱鞘周围有轻微带状粘连,肌腱段本身同周围组织之间无粘连发生,粘连评分指数、肌腱平均滑动距离以及近节趾间关节(PIP)屈曲角度,均优于对照无滑膜肌腱组,P<0.01。4. 人胚腱细胞和滑膜细胞体外分离培养鉴定肌腱细胞和滑膜细胞在含有10%血清的DMEM培养液中贴壁生长,细胞呈梭形或多角型,外观类似成纤维细胞,两种细胞的分裂增殖速度,肌腱细胞较滑膜细胞缓慢;体外培养的肌腱细胞表达Ⅰ型胶原,原代培养滑膜细胞分别表达VCAM-1和CD68,随传代增加,CD68阳性细胞消失;滑膜细胞UDPGD呈阳性表达。培养的肌腱细胞和滑膜细胞符合体内细胞的表型特点。5. 滑液对培养人腱细胞的影响人肌腱细胞能够在滑液培养基中存活,并增殖,其生长速度普遍比在含血清的培养液中培养时要慢。在各种浓度的牛滑液培养液中,20%浓度组的肌腱细胞,其增殖速度相对最快,优于对照组。没有发现在滑液环境下培养的肌腱细胞UDPGD酶活性高表达以及VCAM-1、CD68阳性等细胞表型的改变。以上实验结果表明: ⑴皮下形成的滑囊腔,实现了人工皮下滑液囊构建的动物模型,囊表层细胞具有滑膜细胞的表型特征及分泌滑液样液体的功能,其功能结构类似关节滑囊腔。⑵无滑膜肌腱在皮下滑囊腔内不但能够存活,而且可被滑膜化。⑶经滑膜化改造的肌腱可明显减轻移植后粘连,有利于屈指(趾)功能恢复,其抗粘连效果明显优于对照组无滑膜肌腱。⑷肌腱细胞和滑膜细胞在体外分离培养,其细胞表型与体内同类细胞相同。⑸关节滑液可以提供肌腱细胞基本的代谢营养,并能使肌腱细胞分裂增殖,且不会造成细胞表型改变。单纯的滑液并不是改变滑膜化肌腱表层结构的决定性因素,肌腱滑膜化还有别的原因。