荧光探针法测定药物残留量及其分析应用

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21世纪初以来由于巴比妥类等中枢抑制药的安全性差,可致使动物嗜睡、生长加速,镇静催眠药成瘾和被滥用已在许多国家成为严重的社会问题之一。而激素因可令水产品生长的迅速且肥大,亦被国家列为禁止添加或使用的食品添加剂之一。同时鉴于抗生素类药物在动物疾病预防与治疗上的广泛使用,对动物源性食品中镇静剂、激素、抗生素等药品残留的有效监测已经成为保障食品安全的一个重要环节。目前传统的镇静剂、激素、抗生素等药品残留检测方法有液相色谱法、气相色谱法、质谱法、色谱质谱联用法、生物测定法和酶抑制法等。但色谱法等大型仪器设备庞大,样品预处理步骤复杂,分析时间长,操作复杂,价格昂贵,不易推广;与酶抑制法相比,荧光探针法具有简便、节俭、快速、灵敏度高、动态响应范围宽、回收率高等优点。确定荧光探针技术对药物残留量检测具有重要意义。本论文主要包含以下几个方面的内容:1.概述了荧光探针法的基本原理,综述了镇静剂、激素、抗生素等药品的使用现状、危害,以及检测镇静剂、激素、抗生素等药物残留的一些方法及其应用。2.探索了几种测定镇静剂、激素、抗生素等药物残留的荧光探针法:(1)荧光桃红在pH为6.00的C-L缓冲溶液中,能与一定浓度的十六烷基三溴化铵发生荧光增强反应,加入苯巴比妥后,体系的荧光强度降低,且其降低程度(ΔF值)与苯巴比妥的加入量呈良好的线性关系,线性范围为0.008~0.72mg/L,检出限为0.002mg/L。据此建立了测定镇静剂苯巴比妥残留量的新方法。由此体系检测苯巴比妥在动物血清中的含量,回收率:93.6%~97.3%,相对标准偏差:2.24%~3.15%,结果满意。(2)在pH为8.60的Sфrensen缓冲溶液中,水溶性荧光素与一定浓度的十六烷基三甲基溴化铵发生荧光淬灭反应,加入阿莫西林后,体系的荧光强度增强,且增强程度与阿莫西林的加入量呈良好的线性关系,线性范围为0.006~0.72mg/L,检出限为0.0018mg/L。据此建立了测定青霉素类抗生素阿莫西林残留量的新方法。由此体系检测阿莫西林在动物血清中的含量,回收率为98.4%~100.8%,相对标准偏差为1.58%~3.23%,结果满意。(3)在pH为4.00的Britton-Robinson (B-R)缓冲溶液中,一定浓度的十六烷基三甲基溴化铵与曙红Y发生荧光增强反应,加入头孢他啶后,体系的荧光强度降低,且其降低程度与头孢他啶的加入量呈良好的线性关系,线性范围为0.008~0.8mg/L,检出限为0.018mg/L。据此建立了测定头孢菌素类抗生素头孢他啶残留量的新方法。由此体系检测头孢他啶在人体代谢(血清和尿液)中的含量,回收率在97.5%~102.6%之间,相对标准偏差为1.82%~2.06%,结果满意。(4)在pH6.00的Clark-Lubs (C-L)缓冲液中,钙黄绿素与一定浓度的十六烷基三甲基溴化铵发生了荧光淬灭反应,加入左炔诺孕酮后,体系的荧光强度增强,且其增强程度与药品加入量呈良好的线性关系,其线性范围为0.006~0.72mg/L,检出限为0.0015mg/L。据此建立了测定甾体激素左炔诺孕酮残留量的新方法。由此体系检测左炔诺孕酮在动物血清中的含量,回收率:94.3%~102.0%之间,相对标准偏差:1.75%~3.50%,结果满意。3.开展荧光探针和药品(镇静剂、激素、抗生素等)相互作用的机理研究,研究了荧光试剂,荧光试剂和药物,荧光试剂和表面活性剂,荧光试剂、表面活性剂及药物的紫外与荧光光谱,并初步探讨了它们相互作用的机理。
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