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狂犬病是由狂犬病病毒引起的一种急性人畜共患传染病,能够引起中枢神经系统功能障碍,发病后死亡率几乎100%。人或动物一旦被咬伤后需要立即暴露后预防(Post-exposure Prophylaxis,PEP),这是目前唯一有效的治疗方法。ⅢII级暴露后需注射免疫球蛋白,其剂量按照体重计算,人源狂犬病免疫球蛋白(Human Rabies Immune Globulin,HRIG)按照 20 IU/kg,马源狂犬病免疫球蛋白(Equine Rabies Immune Globulin,ERIG)按照40IU/kg计算。于伤口部位或周围局部浸润注射(局部注射),如果有剩余,应将其注射到远离疫苗注射部位的肌肉,以期在患者自身能够产生有效的中和抗体前抑制病毒入侵外周神经系统(系统注射)。现实情况中,假设一个成年人的体重为50kg,目前市售的人狂犬病免疫球蛋白规格通常为100IU/ml,根据这种计算方法需要通过局部浸润注射和系统注射共近1Oml的RIG。有许多病人的伤口在脚趾或指尖,则大部分的RIG是通过全身注射。然而,人狂犬病免疫球蛋白价格昂贵,不能广泛应用。此外,全身注射狂犬病免疫球蛋白在狂犬病免疫接种中的作用仍不清楚。考虑到以上几点,我们模拟了 III级暴露后不同剂量以及不同部位注射的狂犬病疫苗联合免疫球蛋白对血液中狂犬病特异性抗体以及中和抗体产生的影响,以确定全身注射在狂犬病疫苗接种中的作用。通过模拟III级暴露后预防对小鼠进行免疫接种,首先,在不同注射部位,以等量的狂犬病免疫球蛋白联和狂犬病疫苗免疫小鼠,通过酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测其血清中 IL-4、IFN-y的产生情况,通过快速荧光灶抑制试验(Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test,RFFIT)检测血清中的中和抗体滴度,以研究不同部位注射的狂犬病免疫球蛋白对小鼠细胞免疫及体液免疫的影响。继而在相同的部位,以不同剂量的免疫球蛋白接种小鼠,通过ELISA和RFFIT方法分别检测血清中的特异性抗体和中和抗体的滴度,以研究不同剂量免疫球蛋白对小鼠非特异性和适应性免疫效果的影响。实验结果表明,注射不同部位的狂犬病免疫球蛋白的免疫小鼠ELISA检测细胞因子的产生水平结果均为背景值,无统计学意义。RFFIT检测血清中中和抗体滴度显示,所有小鼠在第7天后均发生阳转,混合注射组(狂犬病免疫球蛋白和狂犬病疫苗预混后注射),明显低于同侧注射组和异侧注射组,说明狂犬病免疫球蛋白不宜和狂犬病疫苗混合注射,第7d后狂犬疫苗发挥免疫保护作用,中和抗体滴度明显上升。其中对照组,即仅注射狂犬病疫苗组与以上不同注射部位组之间没有明显差异。以上结果提示,狂犬病免疫球蛋白的不同注射部位对狂犬病疫苗细胞免疫和体液免疫的效果没有显著影响。注射不同剂量的狂犬病免疫球蛋白的小鼠血清ELISA检测结果显示,其中注射0.2IU剂量的免疫球蛋白的小鼠血清中抗体滴度在第1天时达到0.49EU/ml,注射最低剂量0.05IU的小鼠血清中抗体滴度也于第1天时达到0.37EU/ml。但注射不同剂量的人狂犬病免疫球蛋白的小鼠的抗体滴度均在阳性阈值下(0.6EU/ml)。RFFIT测定血清中的中和抗体滴度结果显示,首次免疫后第7天时,所有6组小鼠均发生阳转,即血清中的中和抗体滴度大于0.5IU/ml,由于狂犬病疫苗产生的免疫应答,抗体滴度在第7天和第14天之间显著增加,6组均值方差分析并无显著性差异。结果表明,狂犬病免疫球蛋白的不同剂量对狂犬病疫苗的非特性异性免疫及适应性免疫均无显著影响。综合我们的结果,在Ⅲ级暴露后预防处置中,系统注射狂犬病免疫球蛋白的注射部位及注射剂量对于狂犬病疫苗非特异性免疫、细胞免疫及体液免疫的效果没有显著影响。结果提示,Ⅲ级暴露后预防处置中狂犬病免疫球蛋白的主要作用是通过抗原、抗体间的中和作用瞬时消灭伤口周围的狂犬病病毒,而对于血液中中和抗体的产生以及特异性抗体的产生几乎没有影响。