论文部分内容阅读
胃溃疡是消化系统的常见疾病之一,它是一种以组织坏死为特征,伴有中性粒细胞浸润,血流量减少,氧化应激和炎症反应增加的病变。胃溃疡普遍存在于人类生活中,且病因较为复杂,因此寻找一种有效且安全的胃溃疡治疗药物是当前研究的热点。类人胶原蛋白(Human-like Colllagen,HLC)是本实验室采用基因工程技术发酵生产的水溶性胶原蛋白。相关研究已证明其可以促进伤口的愈合,然而HLC对胃溃疡的愈合功效还尚待探索。本研究重点探究了HLC及其模拟胃内消化降解产物(HLCP)对胃溃疡的愈合功效及其作用机制。主要研究内容及实验结果如下:
(1)模拟胃部消化条件对HLC进行了体外模拟消化实验,通过SDS-PAGE凝胶电泳和Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析,研究了HLC在模拟消化前后分子量的变化。结果显示:HLC在经胃部消化后发生了消化降解,消化产物为低分子量且分子量分布范围较广的HLCP。
(2)建立60%乙酸诱导的大鼠慢性胃溃疡模型,口服HLC和HLCP连续治疗4天和7天,通过进行H&E染色分析、免疫组化分析、Masson染色、Westernblot实验和试剂盒分析,考察了HLC和HLCP对胃溃疡愈合的促进作用。结果显示:口服HLC或HLCP均可以减小胃溃疡的面积和深度,促进胃溃疡的愈合,并且口服高剂量的HLC和HLCP对胃溃疡的愈合效果与阳性药奥美拉唑效果相似。此外,HLC和HLCP可以增加生长因子(EGF,HGF,VEGF,bFGF和TGF-β1)和HGF受体(HGFr)蛋白的表达,促进胶原蛋白沉积,调节一氧化氮合酶(NOS)的活性,并降低组织中炎症细胞因子(TNF-α,IL-6,IL-10)和内皮素-1(ET-1)水平。HLC和HLCP对胃溃疡的治疗效果无显著性差异。
(3)建立大鼠幽门结扎模型,通过测量胃内分泌容量、胃液pH和胃蛋白酶活性,考察了HCP和HLCP对胃内分泌的影响。结果显示:HLC和HLCP显著上调了胃液pH,但对胃内分泌容量和胃蛋白酶的活性没有显著影响。因此,HLC和HLCP还可能通过调节胃液pH促进胃溃疡的愈合。
(4)采用人胃粘膜上皮细胞(GES-1),通过进行MTT细胞实验和细胞划痕实验,考察了HLC和HLCP对细胞增殖和细胞迁移的影响。结果显示:HLC和HLCP均可以促进胃粘膜细胞发生增殖和迁移,且HLCP对细胞增殖和迁移的促进作用更加显著。因此类人胶原蛋白对胃溃疡愈合的促进作用主要是由它的消化产物引起的。
综上所述,本研究首次探索了口服类人胶原蛋白对胃溃疡的治疗功效,并阐明了其作用机制,该研究为将HLC开发为一种治疗胃溃疡的功能性食品提供了实验数据和理论支持。
(1)模拟胃部消化条件对HLC进行了体外模拟消化实验,通过SDS-PAGE凝胶电泳和Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析,研究了HLC在模拟消化前后分子量的变化。结果显示:HLC在经胃部消化后发生了消化降解,消化产物为低分子量且分子量分布范围较广的HLCP。
(2)建立60%乙酸诱导的大鼠慢性胃溃疡模型,口服HLC和HLCP连续治疗4天和7天,通过进行H&E染色分析、免疫组化分析、Masson染色、Westernblot实验和试剂盒分析,考察了HLC和HLCP对胃溃疡愈合的促进作用。结果显示:口服HLC或HLCP均可以减小胃溃疡的面积和深度,促进胃溃疡的愈合,并且口服高剂量的HLC和HLCP对胃溃疡的愈合效果与阳性药奥美拉唑效果相似。此外,HLC和HLCP可以增加生长因子(EGF,HGF,VEGF,bFGF和TGF-β1)和HGF受体(HGFr)蛋白的表达,促进胶原蛋白沉积,调节一氧化氮合酶(NOS)的活性,并降低组织中炎症细胞因子(TNF-α,IL-6,IL-10)和内皮素-1(ET-1)水平。HLC和HLCP对胃溃疡的治疗效果无显著性差异。
(3)建立大鼠幽门结扎模型,通过测量胃内分泌容量、胃液pH和胃蛋白酶活性,考察了HCP和HLCP对胃内分泌的影响。结果显示:HLC和HLCP显著上调了胃液pH,但对胃内分泌容量和胃蛋白酶的活性没有显著影响。因此,HLC和HLCP还可能通过调节胃液pH促进胃溃疡的愈合。
(4)采用人胃粘膜上皮细胞(GES-1),通过进行MTT细胞实验和细胞划痕实验,考察了HLC和HLCP对细胞增殖和细胞迁移的影响。结果显示:HLC和HLCP均可以促进胃粘膜细胞发生增殖和迁移,且HLCP对细胞增殖和迁移的促进作用更加显著。因此类人胶原蛋白对胃溃疡愈合的促进作用主要是由它的消化产物引起的。
综上所述,本研究首次探索了口服类人胶原蛋白对胃溃疡的治疗功效,并阐明了其作用机制,该研究为将HLC开发为一种治疗胃溃疡的功能性食品提供了实验数据和理论支持。