目的:中药材的品质是中药临床疗效的基本保证,但在实际生产与贸易中,单独利用某一种品质评价方法(如性状鉴定、分子鉴定等),较难实现中药材品质的全面合理评价。理想的中药材品质评价方法应将外观性状、化学成分、分子生物评价三者相结合,实现对中药材的多维度准确评价,确保中药材的品质。广藿香Pogostemon cablin(Blanco)为唇形科刺蕊草属植物,以干燥地上部分入药,具有芳香化浊,开胃止呕,发表解暑之功效,是著名的“十大南药”之一,临床使用广泛,疗效甚佳,亦是当前新型冠状病毒肺炎防疫中的重要中药。受环境条件、栽培技术、加工方法等影响,各地所生产的广藿香在外观形态、化学成分、基因水平都存在一定的差异,其品质也有相应的差别,从而造成了广藿香品种混乱,分类方法复杂等问题。近年来,较高的经济效益促使广藿香的混伪品涌现,对消费者造成无法弥补的经济损失及健康危害。因此,在当前南药资源大开发的背景下,准确评价不同栽培品种及化学型的广藿香,对于这一岭南名药的质量控制及合理利用具有重要意义。广藿香主含的挥发油成分是评判其质量的重要指标,而腺毛是挥发油合成和分泌的主要场所。有研究表明,植物腺毛的形态特征不仅是植物分类的可靠依据,其生长发育状态甚至可影响中药材的整体品质。基于以上事实,本研究针对广藿香这一分类混乱、混伪品难以区分的中药,探索建立“性状评价+化学评价+分子评价”三者结合的中药材多维度品质评价体系,从广藿香表皮毛微形态特征、挥发油中有效成分含量分析和DNA分子鉴定等多角度出发,对传统评价和分类方法进行创新和优化,以更加客观准确地鉴评其真伪优劣,实现中药“辨状论质”的科学阐释;同时,开发一种简单高效的方法,以区分广藿香及其混伪品,保障消费者权益及临床用药安全,为中药质量控制以及探讨广藿香品质形成机理研究提供参考。方法:1.性状及微性状鉴别评价:基于广藿香叶表皮毛特征,以8个不同品种来源,2个采收期(6月末和10月末)的广藿香叶片为材料,通过肉眼及体视镜观察叶片形态特征,水合氯醛透化法制片观察叶表皮毛特征,使用Microsoft Excel 2019整理统计数据,SPSS 23.0统计学软件对叶表皮毛密度、腺毛直径进行方差分析、主成分分析和聚类分析,对样品进行分类,并将分类结果与传统分类相比较,以实现广藿香的“辨状”。2.化学成分鉴别评价:采用气相色谱法测定不同品种来源广藿蕾香甲醇提取部分的广藿香酮和广藿香醇含量,使用Microsoft Excel 2019整理数据,SPSS 23.0统计学软件对平均含量进行聚类分析,对广藿香样品的化学型进行分类,以实现广藿香的“论质”。将结果与表皮毛密度进行关联分析,探究性状表型与化学成分之间的关系。3.分子鉴定:采用DNA条形码技术,扩增不同品种来源广藿香样品的ITS2序列及matK序列并进行测序分析。基于二代测序技术,使用SPAdes基因组组装软件、GeSeq基因注释软件、mVISTA基因组全局比对软件对不同品种来源广藿香的叶绿体基因组进行组装、注释、比对分析。4.正品与混伪品的特异性分子鉴别:基于ITS2序列,使用Primer3.0设计特异性鉴别引物,优化特异性PCR反应条件,鉴别广藿香及其混伪品。结果:1.基于广藿香叶表皮毛特征(叶表皮毛密度和直径),可将8个不同品种来源,2个采收期的广藿香分为了 4大类,与传统分类结果有着很好的一致性。2.基于气相色谱法测定广藿香甲醇提取部分广藿香醇及广藿香酮含量,使用统计学方法进行聚类分析,将8个不同品种来源,2个采收期的广藿香分为3种化学型,与前人研究结果一致。3.DNA条形码测序分析结果表明,8个不同品种来源的样品均为广藿香。获得了8个不同品种来源广藿香的叶绿体全基因组,比较基因组学研究发现8个样品的叶绿体基因组均较为保守,并筛选出了其中的3个高变区(rbcL、ndhB、rrn23)。4.基于ITS2序列所设计的鉴别引物特异性良好,在优化的PCR反应条件下,广藿香原植物、饮片及中成药均出现清晰明亮的特异性电泳条带,混伪品无条带。结论:1.基于广藿香叶表皮毛特征建立了一种新的广藿香分类方法,补充了表皮毛特征这一植物表型在广藿香品种分类中的应用,证实了表皮毛特征在广藿香分类中的作用。2.建立了一种气相色谱法测定广藿香中广藿香醇和广藿香酮含量的新方法,该方法无需提取广藿香挥发油,大大提高了品质评价的实效性;各样品化学成分含量与表皮毛特征的关联分析表明,二者之间存在一定的关联性,初步证实了广藿香腺毛特征与其质量之间的相关性。3.验证了各样品基源的准确性;与多年前的研究报道结果相对比,发现不同产地及品种来源广藿香经过多年栽培引种,在基因水平上发生了变异。广藿香叶绿体基因组中3个变异较大的区域(rbcL、ndhB、rrn23)可作为候选DNA条形码用于其栽培品种及化学型的鉴别。4.建立了一种特异性PCR鉴别方法,可以准确鉴别广藿香及其混伪品,此方法对降解程度较严重的广藿香干燥药材及中成药同样适用,应用前景广阔。本研究通过对不同品种来源广藿香叶表皮毛特征的观察分析,有效成分化学含量测定及分子鉴定,建立了一种“性状评价+化学评价+分子评价+混伪品鉴别”的中药材多维度品质评价体系;获得了 8个不同品种来源的广藿香叶绿体全基因组,为广藿香的超级DNA条形码研究提供了基础;验证了广藿香表皮毛特征与化学成分含量之间的相关性,为广藿香的品种分类及优劣评价提供了更为全面系统的方法,从现代科学角度对中药材“辨状论质”这一传统经验进行了初步阐释,也为相关中药材品质评价方法研究提供了新的思路和参考。