水解鱼蛋白对摄食高植物蛋白饲料的大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)幼鱼生长性能的影响及其代谢组学初步分析

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本文以我国重要的海水养殖鱼类大菱鲆(Scophthalmus maximusL.)为研究对象,在室内流水养殖系统进行养殖实验,研究富含海洋性多肽的水解鱼蛋白对大菱鲆幼鱼生长性能的影响,并对其代谢组学进行了初步分析,探讨影响大菱鲆幼鱼生长的作用机制。本文的研究内容和主要研究结果如下:  1.不同分子量水解鱼蛋白对大菱鲆幼鱼生长和消化的影响  设计5组等氮等脂等能的饲料,在室内流水系统进行68d的养殖实验,探讨高植物蛋白饲料中添加不同分子量水解鱼蛋白对大菱鲆(16.05±0.03g)幼鱼生长和消化能力的影响。饲料中分别添加5.4%超滤水解鱼蛋白(UF)记作UF10组、5.5%水解鱼蛋白(FPH)记作FPH10组及5.5%截留水解鱼蛋白(RF)记作RF10组,其占饲料蛋白均为10%,PP组不添加水解蛋白,UF10、FPH10、RF10及PP组鱼粉均为18%,对照组记作FM组鱼粉为67.5%,每个处理组设3个重复。结果表明,FM组的特定生长率与UF10、FPH10及PP组无显著差异(P>0.05);饲料效率、蛋白质效率和蛋白质沉积率在FM组与UF10组无显著差异(P>0.05),但显著高于FPH10、RF10及PP组(P<0.05);饲料干物质和蛋白质消化率在UF10、FPH10及RF10组显著高于PP组(P<0.05),但显著低于FM组(P<0.05),在UF10组显著高于FPH10和RF10组(P<0.05);不同处理对饲料氨基酸和牛磺酸的消化率均产生显著影响(P<0.05),趋势为FM组最高,其次为UF10组,PP组最低;半胱氨酸和牛磺酸的消化率在添加水解鱼蛋白的3组(UF10、FPH10和RF10组)和不添加水解鱼蛋白的2组(FM和PP组)呈相反的趋势。上述结果表明,在高植物蛋白饲料中添加低分子量水解鱼蛋白(UF),大菱鲆幼鱼的生长和饲料利用虽仅有升高的趋势,但UF、FPH以及RF都显著提高了大菱鲆对饲料干物质、蛋白质和氨基酸的消化率,且UF对消化的提高优于FPH和RF,此外,添加不同分子量水解鱼蛋白似乎都降低了牛磺酸的消化率。  2.不同水平的超滤水解鱼蛋白替代鱼粉对大菱鲆幼鱼生长和消化的影响  本文研究不同水平的超滤水解鱼蛋白替代鱼粉对摄食高植物蛋白饲料的大菱鲆幼鱼生长、饲料利用和消化率的影响。超滤水解鱼蛋白为酶解太平洋狭鳕鱼(Theragra chalcogramma)后通过超滤膜获得。饲料UF0、UF5、UF10、UF15和UF20组为用占饲料蛋白分别为0%、5%、10%、15%和20%的超滤水解鱼蛋白替代鱼粉蛋白,CAA10组为用占饲料蛋白10%的晶体氨基酸替代鱼粉,UF0、UF5、UF10、UF15、UF20和CAA10组的植物蛋白占饲料蛋白的比例均为68%, PP组的植物蛋白占饲料蛋白的比例为78%。每个处理组设3个重复,对初重为16.05±0.03g大菱鲆幼鱼进行68天的养殖实验。实验结果表明:所有处理组的摄食率均无显著性差异(P>0.05);特定生长率在UF0和UF10组显著高于UF20组(P<0.05),但在 UF0、UF5、UF10、UF15、PP、CAA10组间均无显著差异(P>0.05);饲料效率在UF0组最高而在UF20组最低;蛋白质效率在UF0组显著高于UF20、PP和CAA10组(P<0.05);蛋白质沉积率在UF0、UF5、和UF10组显著高于UF20组(P<0.05),但与UF15、PP和CAA10组差异不显著(P>0.05);饲料干物质、蛋白质和氨基酸的表观消化率在低水平超滤水解鱼蛋白替代鱼粉下有显著的升高。上述结果表明,适量的超滤水解鱼蛋白可以提高大菱鲆对高水平植物蛋白饲料的消化能力;用超滤水解鱼蛋白替代鱼粉占饲料总蛋白比例为10%时,大菱鲆幼鱼的生长和饲料利用有增加的趋势;另外,饲料中高水平水解鱼蛋白影响大菱鲆生长的原因可能并不主要是其中含有高比例游离氨基酸造成。  3.基于核磁共振对水解鱼蛋白影响大菱鲆幼鱼生长性能的代谢组学初步分析  本文利用1H核磁共振(NMR)波普鉴定肝脏和肌肉中的代谢物,研究不同分子量和不同水平水解鱼蛋白对大菱鲆幼鱼肝脏和肌肉代谢的影响,探究饲喂含水解鱼蛋白饲料对大菱鲆幼鱼机体代谢的影响。通过用Chenomx Suite软件分析将大菱鲆肝脏和肌肉的有1H-NMR谱进行分段积分,然后在进行多元统计分析,在肝脏中准确鉴定出代谢物40种,包括氨基酸代谢、糖代谢、三羧酸循环、甲基代谢、牛磺酸代谢、甜菜碱代谢、细胞呼吸链的电子传递相关代谢物,另外还有有机酸、胺类物质等其他代谢物。在肌肉中准确鉴定出代谢物37种,所涉及的代谢途径基本与肝脏中相似,仅增加了羟脯氨酸代谢和鉴定的某些代谢物不同。代谢物组间比较结果表明,用添加水解鱼蛋白的饲料饲喂大菱鲆幼鱼可能会影响大菱鲆幼鱼肝脏中谷氨酰胺的变化,且随着水解鱼蛋白添加水平的升高,会进一步引起胆酸、亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、精氨酸和天冬氨酸代谢物变化;同时,可能也会影响肌肉中组氨酸的变化,且随着水解鱼蛋白添加水平的升高,会进一步引起脯氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、胱硫醚、延胡索酸和酪氨酸的变化。另外,水解鱼蛋白分子量的不同可能会影响肝脏中胆酸、亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸和精氨酸和肌肉中谷氨酰胺的变化。  4.饲料中添加超滤水解鱼蛋白和牛磺酸对大菱鲆幼鱼的生长性能及牛磺酸代谢的影响  设计5组等氮等脂的配合饲料,在室内流水养殖系统进行84d的养殖实验,研究超滤水解鱼蛋白替代鱼粉和添加牛磺酸对大菱鲆幼鱼(4.17±0.00g)生长、牛磺酸代谢和肠道组织形态的研究。以含鱼粉30%为对照组记作FM组,UF0和UF0+T组的鱼粉含量为15%,UF10和UF10+T组用超滤水解鱼蛋白替代总蛋白10%,其鱼粉含量为8%,UF0+T和UF10+T组分别再添加0.8%的牛磺酸,每个处理4个重复。实验结果表明,适量超滤水解鱼蛋白替代鱼粉与不替代相比生长和饲料利用有降低的趋势,但差异不显著(P>0.05);单独添加牛磺酸或者与超滤水解鱼蛋白一起一定程度促进大菱鲆幼鱼生长和饲料利用,同时单独添加牛磺酸能够降低肝脏半胱氨酸双加氧酶酶活性和提高身体各组织中的牛磺酸含量(P>0.05);另外,添加牛磺酸和用超滤水解鱼蛋白替代鱼粉对大菱鲆幼鱼前肠组织结构无显著影响(P>0.05),但添加牛磺酸能显著促进中肠发育,超滤水解鱼蛋白对中肠组织结构无显著影响(P>0.05)。上述结果表明,用高水平植物蛋白的饲料饲喂大菱鲆幼鱼时,适量超滤水解鱼蛋白替代鱼粉可以起到与鱼粉相似的生长效果,且再适量补充牛磺酸后,两者能够更好的促进大菱鲆幼鱼的生长。
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