Circ_0072995在宫颈癌中的表达及通过miR-29a/WDR5对Hela细胞增殖和侵袭能力的影响

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研究背景子宫颈癌(cervical cancer)是女性生殖系统中最常见的恶性肿瘤,高危型人乳头瘤病毒(HPV)的持续感染是引起宫颈癌的主要原因。随着研究技术的进展,非编码RNA的研究在肿瘤领域引起关注,从此视角来看我们对宫颈癌的认知有限,因此仍然有必要从新视角继续探索宫颈癌的发生发展机制,利于我们更加全面详细地了解宫颈癌。目前常见的非编码RNA包括环状RNA(circular RNA,circRNA),长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)和微小RNA(microRNA,miRNA)。他们可通过多种机制参与调控肿瘤细胞的生长、恶性转化、细胞迁移和侵袭等过程。CircRNA是一类无5’端帽子结构和3’端poly A尾端,闭合成环的RNA分子。MicroRNA是一类长度为19-25个核苷酸的小RNA分子,它可以通过与下游mRNA结合影响下游基因的表达。CircRNA可以通过海绵吸附作用与miRNA结合影响miRNA的表达,CircRNA/miRNA/mRNA的作用模式在多种癌症的发生和发展中发挥重要作用。环状RNA分子circ_0072995被证实是一个在乳腺癌,膀胱癌,上皮性卵巢癌和肝癌中高表达,发挥海绵吸附作用的促癌因子,目前在宫颈癌中尚无研究报道;在本研究中通过生物信息学结果发现circ-0072995有miR-29a结合的位点,同时miR-29a还有WDR5结合的位点。查阅文献可知miR-29a是一个在非小细胞肺癌,胰腺癌,乳腺癌,甲状腺癌和宫颈癌中表达异常的微小RNA分子。WDR5(WD repeat domain 5)产生的肽链经β-折叠可形成七叶状的蛋白质,WDR5(WD repeat-containing protein 5)主要的功能为参与H3K4的甲基化,及其与MYC相结合产生作用;研究显示WDR5在白血病,胰腺导管腺癌,前列腺癌,乳腺癌,膀胱癌,胃癌,结肠癌,肺癌和食管癌等许多恶性肿瘤中发挥促癌作用。Circ_0072995/miR-29a/WDR5的作用模式在宫颈癌中尚无人研究。研究目的本研究旨在探究circ_0072995在宫颈癌组织中的表达,及其对宫颈癌hela细胞中增殖和侵袭能力的影响和可能的分子机制。研究方法1通过qRT-PCR检测了在58例宫颈癌组织和宫颈癌旁组织中circ_0072995,miR-29a,WDR5等各指标基因水平的表达,以及不同状态下宫颈癌hela细胞中上述各指标的表达。2 Western Blot检测不同状态下hela细胞中WDR5蛋白的表达。3通过CCK-8和Transwell实验检测了不同状态下宫颈癌hela细胞的增殖和侵袭能力。4采用荧光素酶报告基因实验明确了circ_0072995和miR-29a之间以及miR-29a和WDR5之间的直接调控关系。结果1 QRT-PCR实验结果提示circ_0072995在宫颈癌组织中的表达量明显高于宫颈癌旁组织。2在hela细胞中敲低circ_0072995,miR-29a表达增加,WDR5的表达下降;反之亦然,Western Blot实验结果和qRT-PCR结果趋势相同。3在细胞功能实验中,下调circ-0072995可明显抑制了宫颈癌hela细胞的增殖和侵袭能力,而上调circ_0072995则明显促进了宫颈癌hela细胞的增殖和侵袭能力;miR-29a的过表达抑制了宫颈癌hela细胞的增殖和侵袭能力,下调miR-29a则促进了宫颈癌hela细胞的增殖和侵袭能力。4荧光素酶报告基因实验表明circ_0072995可以通过海绵吸附作用直接和miR-29a结合,同时miR-29a也可以和WDR5的mRNA结合。结论Circ_0072995在宫颈癌组织中高表达;在宫颈癌hela细胞中,circ_0072995通过吸附miR-29a,解除了miR-29a对WDR5的抑制,促进了WDR5的表达,从而促进宫颈癌hela细胞的增殖和侵袭能力。
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