目的:金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)是引起食物中毒的常见致病菌,在公共卫生学上具有重要意义,家禽、蛋及肉类产品是金葡菌的主要传播媒介,严重影响着养殖业的发展和人类健康,因此对易受金葡菌污染的食品在流入市场前应进行严格的检测。为确保检验人员的检测能力、规范试剂盒的管理,降低食品中金葡菌的检漏和检错率,应加大力度研制相关的生物特性标准物质,以使金葡菌检测结果真实可靠。本试验对含鸡肉基质的金葡菌菌体标物质的制备展开一系列研究,在生物标准物质的基础上添加基质,使其符合实际检测情况,给今后同类型标准物质的制备及验证提供参考价值。方法:本试验首先对三种计数金葡菌的方法进行选择。采用PCA计数法、Baird-Parker倾注法、Baird-Parker平板涂布法三种计数方法,对含菌量相同的金葡菌样液进行计数,通过结果分析对比三种方法的稳定性和再现性,从而选择计数金葡菌的最优方法。绘制金葡菌的浓度曲线。采用比浊法测定,利用多功能酶标仪测定菌悬液的光密度,并将所测的OD600值与其对应的菌落数对数值作图,绘制出该菌在一定时间范围内的菌浓度曲线,以此作为添加菌量的依据。对预添加的鸡肉基质进行抗生素残留检测,确定其符合要求后,进行灭菌处理,鸡肉基质采取60Co-γ来菌,使基质菌落总数<10 CFU/g,达到基质无菌的要求。对标准物质冻干保护剂进行筛选试验,筛选冷冻干燥贮藏金葡菌保护剂的最佳配比。利用L9(34)正交表安排试验,选择脱脂乳、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、L-谷氨酸钠四种保护剂单剂,每个单剂设计三个添加水平。最终选择能使金葡菌在冷冻干燥中有效减少死亡的保护剂,用于金葡菌标准物质的制备。冻干标准物质在使用前需复水,因此需对添加有保护剂的鸡肉基质进行脱水性试验,以决定复水量。对研制的标准物质样品进行均匀性检测,稳定性追踪以及不确定度的评估,其中不确定度主要产生在电子天平以及标准物质的定值方法上,结合不确定度对标准物质进行最终定值。结果:金葡菌计数方法,采用Baird-Parker倾注法操作简便、结果稳定、再现性好。以鸡肉作为基质的金葡菌菌体标准物质共进行了 5个批次的成品制备,每个批次分别制备70份。保护剂配方筛选结果为:20%脱脂乳+8%PVP+12%蔗糖+1%L-谷氨酸。鸡肉和保护剂的脱水性结果:5g鸡肉+4mL保护剂冻干后为2g,脱水率为17.57%。因此冻干标准物质复水量约7mL。均匀性试验结果方差分析P值均大于0.05,表明研制的5批标准物质批次内以及批次间无显著差异。稳定性试验表明,标准物质在-20℃条件下,在120天时可以稳定在140CFU/瓶。不确定度主要是围绕试验过程中对标准物质造成主要影响的步骤进行分析评估,其中电子天平的不确定度为2.7934mg,可忽略不计。标准物质的定值方法不确定度U=11,因此标准物质最终值为:定值结果±11。结论:本实验建立了含鸡肉基质的金葡菌菌体标准物质的研制方法,制备的标准物质均匀性良好,在-20℃下短期保存具有良好的稳定性。