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本课题研究了一种临床上对白癜风具有明显治疗,效果的中药复方,其组分为:紫草15g,丹参12g,地骨皮12g,白芨12g,当归10g,防风10g,川芎9g,甘草6g,透骨草6g。本课题研究了复方中药的活性成分,并探讨了其对白癜风治疗的细胞机制。利用醇萃取和水煎两种常用的中药药剂处理方法,获得了该复方中药的水提液和醇提液。利用小鼠B16黑色素瘤细胞作为体外测试模型,考察了其对细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑色素含量的影响,确定中药醇提液和水提液对细胞作用的最佳时间均为48h、最佳作用浓度均为1mg/mL。在最佳作用条件下中药水提液和中药醇提液的作用效果基本相当,这两种提取液均对B16细胞具有良好的作用效果。为了探究这两种药液作用的分子机制是否相同,本课题还探究了两种药液对黑色素合成相关基因转录水平和蛋白表达水平的影响。WesternBlot实验显示,中药水提液作用下TYR和MITF蛋白表达水平显著提高了2.4倍和3.9倍,中药醇提液作用下TYR、MITF蛋白表达水平显著提高了3.5倍和7.5倍。中药水提液和中药醇提液作用下TRP-1、TRP-2蛋白的表达水平均没有显著变化。因此中药水提液和中药醇提液均通过提高MITF的蛋白表达水平,使得酪氨酸酶的活性提高,从而促进黑色素的合成,达到治疗白癜风的效果。 黄酮类物质存在于该复方大部分的单味药材中,为了分析黄酮类物质在此复方中的生物活性,我们利用超声提取、AB-8大孔吸附树脂纯化技术对该复方中药中的黄酮类化合物进行了初步的分离纯化,并测定了其对B16细胞的影响。实验结果表明,黄酮类物质提取液对B16细胞的最佳作用浓度为0.7875μg/mL,最佳的作用时间为48h。Western Blot实验发现,和未加中药的对照组相比中药总黄酮提取液可以显著提高TYR(增加了4.41倍)、MITF(增加了5.86倍)、TRP-1(增加了1.99倍)和TRP-2(增加了2.53倍)蛋白的表达水平。说明中药总黄酮提取液通过提高MITF、TRP-1和TRP-2蛋白的表达水平,调控了TYR基因表达水平的提高,从而促进黑色素的合成,达到治疗白癜风的效果。