目的：华支睾吸虫(肝吸虫)流行于我国十多个省(自治区)，治疗药物主要为吡喹酮和阿苯哒唑。大量的实验数据表明，血吸虫、肠道线虫、一些绦虫等已出现了针对吡喹酮或阿苯哒唑的抗性。虽然目前尚未发现肝吸虫针对吡喹酮或阿苯哒唑的抗性问题，但提前研究可能的替代性药物仍有必要。苹果酸脱氢酶(EC1.1.1.37)属于NAD依赖的2-羟基羧酸脱氢酶。绝大多数真核细胞内具有两种苹果酸脱氢酶：胞浆苹果酸脱氢酶(cMDH)和线粒体苹果酸脱氢酶(mMDH)。mMDH为三羧酸循环的重要组成部分，cMDH和mMDH还与天冬氨酸转氨酶一起组成天冬氨酸-苹果酸穿梭体，参与转移细胞内还原性平衡物，另外在糖酵解和糖异生等方面也起重要作用。cMDH和mMDH有可能作为药物或疫苗的靶标。苹果酸脱氢酶还可用于检测生物材料中的CO2、醋酸盐、乙酰CoA、柠檬酸盐、谷氨酸-草酰乙酸转移酶、ATP-柠檬酸裂解酶和柠檬酸合成酶等。所以，体外表达并得到纯化的苹果酸脱氢酶，并对其结构和功能进行研究，具有一定的价值。 方法：建立华支睾吸虫成虫cDNA文库，进行大规模测序，通过各种生物信息学分析，确定肝吸虫胞浆和线粒体苹果酸脱氢酶的cDNA，并以Northernblot鉴定是否为全长基因。构建pQE-30胞浆苹果酸脱氢酶基因和pGEX-4T-1线粒体苹果酸脱氢酶基因的重组质粒，重组质粒转染大肠杆菌后，IPTG诱导表达，以BDTALONTM金属离子亲和树脂和GST融合蛋白亲和纯化柱分别纯化体外表达的重组肝吸虫胞浆苹果酸脱氢酶(Cs-cMDH)和线粒体苹果酸脱氢酶(Cs-mMDH)。对纯化后的表达产物以SDS-PAGE、Westernblot和质谱进行鉴定，测定苹果酸脱氢酶活性，对表达的重组产物进行酶活性抑制实验，制备Cs-cMDH第195位组氨酸及周围氨基酸的突变株，制备Cs-cMDH蛋白晶体。