目的:肿瘤流行病学统计显示乳腺发病率和死亡率在女性肿瘤中排名第一,全球每年新增大约170万乳腺癌病例。乳腺癌的发病率逐年增加,发病年龄呈年轻化趋势。尽管乳腺癌的综合治疗措施不断改善,但乳腺癌仍是导致女性死亡的重要原因之一。以前的研究表明,VASP的主要功能是调节细胞骨架重排,在肿瘤细胞转移过程中发挥重要作用。最近的研究表明VASP和Wnt/β-catenin信号通路之间可能存在联系,然而,其作用机制仍不清楚。本研究的目的是为了探讨VASP和Wnt/β-catenin信号通路在乳腺癌发生发展中的作用机制。方法:1、探讨在乳腺癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路激活VASP表达的作用机制:通过生物信息学分析TCF7L2蛋白在VASP启动子区的富集作用;通过Ch IP实验和双荧光素酶报告基因实验检测β-catenin和TCF4与VASP启动子的相互作用;通过RT-q PCR,western blot和细胞免疫荧光实验检测Wnt/β-catenin信号通路对VASP表达的调控机制。2、VASP的表达水平与乳腺癌的发生发展以及Wnt/β-catenin信号通路的相关性研究:通过生物信息学分析,RT-q PCR,免疫组化实验分析VASP的表达水平与乳腺癌的发生发展的相关性;在乳腺癌细胞中,敲降VASP后,通过转录组测序,RT-q PCR,western blot实验观察VASP与Wnt/β-catenin信号通路的相关性。3、在乳腺癌细胞中VASP激活Wnt/β-catenin信号通路的机制研究:通过western blot,TOP/FOP flash,细胞免疫荧光实验和FRAP实验观察VASP对β-catenin和DVL3蛋白入核的影响;通过蛋白质谱,Co-IP,pulldown实验,Ch IP实验探讨VASP与DVL3,β-catenin和TCF4形成蛋白复合物,调控Wnt/β-catenin信号通路的作用机制。4、VASP与Wnt/β-catenin信号通路形成正反馈环路调控乳腺癌细胞增殖和迁移的作用研究:在乳腺癌细胞中,通过CCK-8实验和Transwell实验观察Wnt/β-catenin/VASP正反馈环路对细胞增殖和迁移能力的影响。结果:1、在乳腺癌细胞中,β-catenin和TCF4蛋白能够与VASP启动子相互作用,增加VASP启动子活性,Wnt/β-catenin信号通路的激活能够上调VASP的表达水平,提示VASP是Wnt/β-catenin信号通路的靶基因。2、VASP在乳腺癌组织中的表达水平显著增高,与乳腺癌患者的病理分化,临床分期,淋巴结转移,复发和预后密切相关。3、在乳腺癌细胞中,转录组测序结果显示VASP与Wnt/β-catenin信号通路密切相关,VASP能够激活Wnt/β-catenin信号通路。4、在乳腺癌细胞中,VASP能够促进β-catenin和DVL3蛋白入核,激活Wnt/β-catenin信号通路。5、VASP在乳腺癌细胞核中的表达水平增高,其入核与EVH1和EVH2结构域相关。6、在细胞核中,VASP通过EVH1和EVH2结构域与DVL3,β-catenin,TCF4形成蛋白复合物,激活Wnt/β-catenin信号通路靶基因的表达,促进乳腺癌细胞增殖和迁移。结论:本研究表明,Wnt/β-catenin/VASP恶性正反馈环路促进乳腺癌细胞的增殖和迁移,打破这种正反馈环路可能为乳腺癌治疗提供新的策略。