【摘 要】
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柯萨奇B组病毒(CVB)是引起人类病毒性心肌炎、无菌性脑炎和新生儿全身性感染等疾病的主要病原.对CVB各型别的感染目前均缺乏有效防治手段.该研究通过逆转录PCR技术扩增了CVB1
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柯萨奇B组病毒(CVB)是引起人类病毒性心肌炎、无菌性脑炎和新生儿全身性感染等疾病的主要病原.对CVB各型别的感染目前均缺乏有效防治手段.该研究通过逆转录PCR技术扩增了CVB1编码主要中和抗原的VP1基因,将其连接于pMD18-T载体,进一步亚克隆至pCEP4构建真核表达重组质粒pCEP4-VP1.经酶切、PCR和DNA测序证实了该重组质粒的正确性,表明其可作为侯选的DNA疫苗.pCEP4-VP1转染HeLa细胞后进行Western blot和免疫荧光检测,证明该表达系统可以在细胞内瞬时表达CVB1 VP1抗原.将pCEP4-VP1接种BALB/C小鼠体内,ELISA检测证明小鼠可产生抗CVB1的特异性IgM和IgG,并可诱导产生CTL反应,起到DNA疫苗的作用.将VP1基因亚克隆至pQE-30质粒载体中,构建原核表达系统pQE-30-VP1,用IPTG诱导后可在大肠杆菌BL21中表达VP1蛋白,结果经Western blot检测证实.该结果有助于研究CVB1的抗原性及探讨新的CVB1血清学检测手段.该研究为CVB1感染的诊断和防治提供了理论和实验依据.
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