CSRP1对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

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目的:探讨富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白1(cysteine and glycine rich protein 1,CSRP1)基因过表达对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:体外培养HepG2细胞,分别转染PEX-2-CSRP1重组质粒(过表达组)或PEX-2空载体(空质粒组),另设不做任何处理的HepG2细胞为空白组;通过Western blotting法检测CSRP1基因的表达;MTT法检测0h,24h,48h,72h后HepG2细胞的增殖活性;流式细胞学检测HepG2细胞凋亡。Transwell侵袭实验检测各组HepG2细胞侵袭性;细胞划痕实验检测各组HepG2细胞迁移运动能力变化。结果:1.Western blot实验结果:转染后48h,过表达组中HepG2细胞的CSRP1蛋白的表达水平显著增高。半定量分析结果显示:过表达组蛋白相对表达量为(0.224±0.0165),明显高于空白组(0.0723±0.0138)、空质粒组(0.0730±0.0143)差异有统计学意义(p<0.05);2.MTT检测结果:在三个不同时间段(24h、48h、72h),过表达组的OD值分别为(0.434±0.025)、(0.484±0.039)、(0.619±0.041);空白组OD值分别为(0.521±0.408)、(0.688±0.030)、(0.912±0.036);空质粒组OD值分别为(0.514±0.024)、(0.674±0.028)、(0.876±0.027);在三个时间段,过表达组OD值均明显低于空白组、空质粒组,差异有统计学意义(p<0.05);3.流式细胞学检测凋亡结果:过表达组48h凋亡率为(9.053±0.304)%,高于空白组(4.170±0.212)%、空质粒组(5.097±0.309)%,差异有统计学意义(p<0.05);4.Transwell侵袭实验结果:过表达组48h后穿膜细胞数为(44±8.77)个,明显低于空白组(89±11.81)个、空质粒组(89.40±9.07)个(p<0.05),差异有统计学意义。4.细胞划痕实验结果:在三个时间段(24h、48h、72h),过表达组细胞迁移距离分别为(1.620±0.111)μm、(2.660±0.707)μm、(3.640±0.230)μm,低于空白组(2.400±0.158)μm、(3.720±0.130)μm、(5.260±0.230)μm及空质粒组(2.440±0.219)μm、(3.820±0.110)μm、(5.300±0.245)μm,差异有统计学意义(p<0.05)。结论:过表达CSRP1基因能抑制HepG2细胞的增殖、侵袭及迁移能力,同时促进HepG2细胞的凋亡。
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