目的:通过慢病毒载体将外源性基因整合入目的细胞中,获得能够稳定表达整合基因的细胞系和使其在结肠癌动物模型中作为检测Cre酶功能的一种工具细胞。方法:以pMSCV-loxp-dsRed-loxp-Puro-3xHA-WPRE为模板,用限制性核酸内切酶进行酶切,然后与经过限制性核酸内切酶酶切的pCMVGFP(loxP)lacZ基因在连接酶作用下连接,连接后基因产物感受态内转化,挑取阳性克隆进行酶切验证,同时送检测序,进而获得测序正确pCMV-loxP-dsRed-loxP-lacZ-puro质粒。将构建成功pCMV-loxP-dsRed-loxP-lacZ-puro载体与慢病毒包装载体psPAX2、pMD2G共转染293T细胞,包装后293T细胞进行红色荧光观察并提取包装后293T细胞上清液进行感染MCA38细胞。感染的MCA38细胞分别在感染后第1天和第4天中加入含有嘌呤霉素(2ug/ml)完全培养基进行筛选,向筛选后MCA38细胞中加入含Cre酶的培养基,并记录红色荧光在Omin,30min,60min时荧光变化。结果:1.转化后阳性菌落聚合酶链式反应(PCR)、酶切鉴定以及测序结果均与实验预期结果一致。2.成功构建了能够表达红色荧光蛋白及嘌呤霉素抗性稳定细胞株。3.构建的稳定细胞株可在Cre酶作用下出现红色荧光减弱,在表达红色荧光稳转细胞数量一定情况下,随着Cre酶含作用时间增长(0-60min)红色荧光减弱甚至消失。结论:1.与其他病毒载体相比,慢病毒载体具有转染效率高,连接外源性基因表达效率高。2.Cre/loxp体系对两个loxp位点之间基因表达具有减弱作用,并且这种影响具有时间依赖性。3.构建模式细胞系可作为研究结肠癌发生、发展机制的动物模型的工具细胞。