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浒苔(Enteromorpha)是一种大型绿藻类植物,广泛分布于我国华东、华南沿海,富含蛋白质、维生素、矿物质以及水溶性硫酸化多糖,这些酸性多糖生物活性较强,占藻体干重的50%以上。研究证实浒苔多糖具有抗氧化、抗病毒、抗凝血、抗肿瘤等多种药物学活性。为了成功筛选出一种提高免疫力最为有效的浒苔多糖组分,我们通过乙醇分级沉淀分离纯化浒苔多糖,并探讨不同浒苔多糖组分对机体免疫功能的影响,旨在为浒苔资源的开发利用提供理论依据。1.浒苔多糖分离纯化:将浒苔粉与蒸馏水以1:20(W/V)混合,90℃反复提取3次,浓缩,低温干燥,获得浒苔多糖粗提物。采用Sevage法、Sephacryl-300分子筛层析纯化浒苔多糖粗提物,得到浒苔多糖(Enteromorpha polysaccharides,EP)。用40%、60%、80%乙醇将分级沉淀EP获得3个浒苔多糖组分EP1、EP2和EP3。各组分中单糖、糖醛酸、硫酸根含量存在明显差异,其中EP2的糖醛酸含量22.6%,醛基化程度最高;EP3的硫酸根含量27.16%,硫酸化程度最高。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,EP1、EP2和EP3均为单一条带,其分子量EP1>EP2>EP3。2.浒苔多糖免疫调节活性组分的筛选:(1)EP、EP1、EP2和EP3对体外培养的B淋巴细胞或LPS诱导的B淋巴细胞增殖与母细胞化均有显著促进作用(p<0.05或p<0.01)。(2)EP2组分有促进T淋巴细胞增殖的趋势,仅在EP2浓度为400 ug/m L达到显著水平(p<0.05);但EP、EP1、EP2和EP3均能显著促进Con A诱导的T淋巴细胞增殖(p<0.05或p<0.01)。(3)EP、EP1、EP2和EP3能显著促进LPS诱导的Mφ细胞增殖(p<0.01),促进Mφ细胞的合成与分泌(p<0.01)。比较浒苔多糖各组对T、B和Mφ细胞增殖的影响,EP2的作用效果最好,其最佳作用浓度为400-500ug/m L。3.EP2对小鼠免疫功能的调节作用:通过观察EP2对正常小鼠和免疫抑制小鼠免疫器官指数、血象、细胞免疫和体液免疫功能的影响,研究EP2对小鼠免疫机能的调节作用,结果表明:3.1EP2对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用:(1)EP2可以显著提高免疫抑制小鼠脾脏和胸腺指数(p<0.01),显著增加WBC、LY、RC数量(p<0.01)和PBMC数量(p<0.05),改善骨髓造血机能,显著改善Mφ细胞吞噬功能(p<0.01);(2)EP2能显著提高免疫抑制小鼠的耳肿度及肿胀率(p<0.01),改善其迟发型变态反应。(3)EP2能显著提高免疫抑制小鼠T、B淋巴细胞转化率(p<0.01)且呈现明显量效关系;同时给予125 mg/kg EP2的免疫抑制小鼠CD4~+细胞含量有下降趋势,CD8~+细胞含量及CD4~+/CD8~+比值显著升高(p<0.01)。(4)EP2能显著改善免疫抑制小鼠体液免疫功能,血清IL-2、INF-γ(p<0.05)和IL-4水平(p<0.01)以及血清BSA抗体水平均显著升高(p<0.01)。3.2 EP2对正常小鼠免疫功能的调节作用:(1)EP2可以显著提高正常小鼠脾脏指数(p<0.05)和胸腺指数(p<0.01),显著增加WBC和RC数量(p<0.05)和PBMC数量(p<0.01),改善骨髓造血机能,对改善Mφ细胞吞噬功能效果不显著。(2)EP2在提高正常小鼠的耳肿度及肿胀率效果均不显著,提示其对改善迟发型变态反应效果不显著。(3)EP2可以显著提高正常小鼠T淋巴细胞转化功能(p<0.01),而对B淋巴细胞增殖效果不显著,同时给予125 mg/kg EP2正常小鼠,CD4~+含量上升(p<0.01)和CD8~+细胞含量及CD4~+/CD8~+比值显著上升(p<0.05)。(4)EP2能显著改善免疫抑制小鼠体液免疫功能,血清IL-2以及血清BSA抗体水平均显著升高(p<0.05)。通过3.1和3.2结论可知,浒苔多糖组分EP2能显著改善CTX诱导的小鼠免疫抑制,对正常小鼠免疫功能调节作用虽然不如免疫抑制小鼠,但对部分免疫指标均有有一定程度的改善作用,有望开发成为天然、无毒副作用的免疫增强剂。