论文部分内容阅读
第一部分2型糖尿病对急性缺血性脑卒中患者血栓成分及超微结构的影响第一节糖尿病对急性缺血性脑卒中患者血栓成分的影响目的:糖尿病与急性缺血性脑卒中患者临床不良预后密切相关。除此之外,糖尿病还可能影响凝血系统,但其对缺血性脑卒中致病病因——血栓病理组织学的影响尚不清楚。本研究的目的是探究糖尿病对急性缺血性脑卒中患者血栓成分的影响。方法:回顾性纳入2017年6月至2019年6月我院急性缺血性脑卒中成功取栓的患者。血栓的组织学染色包括苏木精和伊红（hematoxylin andeosin,H＆E）染色、马休猩红蓝染色（Martius Scarlet Blue,MSB）,血管性血友病因子（von Willebrand Factor,vWF）免疫组化染色。根据患者有无糖尿病史或入院时有无高血糖（≥7.8 mmol/L）比较血栓成分的差异。结果:共纳入52名急性缺血性脑卒中患者,其中26名患者既往诊断为2型糖尿病。与非糖尿病患者相比,伴有糖尿病的脑卒中患者入院时血清葡萄糖水平更高（8.90 vs.7.40,P=0.012）。糖尿病患者和非糖尿病患者的基线特征（除吸烟史和血栓位置）、手术过程和临床结局都相似。在血栓组织学方面,与非糖尿病患者相比,糖尿病患者的血栓中纤维蛋白含量较高（44.2%vs.28.3%,P=0.004）,红细胞含量较低（26.0%vs.42.9%,P=0.013）,血小板含量（24.0%vs.21.5%,P=0.694）及 vWF（0.041 vs.0.031,P=0.234）在两类患者血栓中未见明显差异。根据急性缺血性脑卒中患者有无入院高血糖分析后发现,两组患者红细胞（41.6%vs.27.3%,P=0.105）、纤维蛋白（37.6%vs.34.3%,P=0.627）、血小板（21.2%vs.24.2%,P=0.498）和 vWF 因子（0.038 vs.0.034,P=0.284）的含量未见明显统计学差异。结论:与不伴糖尿病的脑卒中患者相比,伴有糖尿病的患者血栓中纤维蛋白含量更多而红细胞含量较少;有无入院高血糖与血栓成分相关性不大。第二节 糖尿病合并入院高血糖对急性缺血性脑卒中患者血栓组织成分和超微结构的影响目的:2 型糖尿病（type2diabetesmellitus,T2DM）影响急性缺血性脑卒中（acuteischemic stroke,AIS）的发生发展和临床预后。然而,糖尿病对血栓特性的影响尚不十分清楚。本研究目的是探究糖尿病合并入院高血糖是否影响急性缺血性脑卒中的血栓组成、超微结构及血栓渗透性。方法:回顾性纳入2017年6月至2021年5月期间我院接受血管内机械血栓清除术的AIS患者。采用马休猩红蓝（Martius Scarlet Blue,MSB）染色定量血栓的组成,扫描电镜（scanning electron microscope,SEM）观察血栓的超微结构。通过计算机断层血管成像（CTA）与平扫CT的HU对比,计算血栓衰减增加（δHU）来评估血栓的渗透性。比较糖尿病入院高血糖患者（ahDM）与非糖尿病入院血糖正常患者（nonDM）在血栓成分、超微结构和渗透性方面的差异。结果:入院时,ahDM患者与nonDM患者相比,NIHSS评分较高（17vs.12,P=0.015）。术后90天随访,ahDM预后良好率较低（mRS 0-1,16.6%vs.44.0%,P=0.038）,但ahDM和nonDM患者在功能独立（mRS 0-2,30.0%vs.56.0%,P=0.061）和功能障碍（mRS 3-5,36.7%vs.36%,P=0.99）方面没有明显差别。ahDM患者的死亡率高于非DM患者（33.3%vs.8.0%,P=0.046）。与nonDM患者相比,ahDM患者的血栓有更多的纤维蛋白（39.4%vs.25.0%,P=0.007）,较少的红细胞成分（21.2%vs.41.5%,P=0.043）,较高的白细胞含量（4.6%vs.3.3%,P=0.004）,而血小板含量无明显差别（27.7%vs.24.6%,P=0.587）。超微结构显示,ahDM患者血栓中多面体红细胞的百分比显著高于非DM患者（分别为68.9%和45.6%,P=0.007）。nonDM患者渗透性血栓的比例高于ahDM患者（82.61%vs.40%,P=0.026）。结论:ahDM患者入院时卒中严重程度较高,3个月后功能预后较差。与非糖尿病患者相比,ahDM患者的血栓中含有更多的纤维蛋白、白细胞和较少的红细胞成分。ahDM患者血栓中多面体红细胞含量和不渗透性血块比例显著升高。第二部分 晚期糖基化终产物通过结合CD36激活Src/Syk-PLCγ2以及RhoA/ROCK信号通路诱导肌球蛋白轻链磷酸化和血小板活化目的:糖尿病已被证实与血小板高反应性有关,在糖尿病高血糖状态下产生的晚期糖基化终产物（advanced glycation end products,AGEs）可能导致血栓形成过程中不受控制的血小板活化。虽然AGEs激活血小板的能力已经确立,但其潜在的信号机制仍不清楚。我们的研究目的是探究晚期糖基化终产物在血小板活化中的机制及其在血栓收缩中的作用。方法:我们利用血小板聚集仪检测了 AGEs诱导的血小板聚集,利用免疫印迹、免疫荧光以及扫描电镜观察血小板活化、扩散。通过免疫共沉淀探究相关信号通路。我们应用FeC13诱导的颈动脉闭塞模型探究了糖尿病对凝血的影响;通过对血凝块的电镜分析,我们探究了活化血小板对血凝块收缩的影响。结果:我们的研究发现AGEs通过与血小板CD36结合调节肌球蛋白Ⅱa（myosin light chain,MLC）轻链磷酸化刺激血小板活化。阻断CD36受体或同时抑制Src激酶及RhoA激酶途径,可以阻止AGEs诱导血小板的形状改变、扩散和MLC磷酸化。与此相一致的是,AGEs诱导了 Syk和磷脂酶Cγ2（PLCγ2）的酪氨酸磷酸化。抑制Syk、Ca2+和MLCK仅部分地抑制MLC磷酸化,提示存在第二条信号通路。我们进一步发现AGEs能够激活RhoA/ROCK诱导MLC磷酸酶（MLCP）的磷酸化。表明AGEs通过激活MLCK和抑制MLCP双重途径诱导MLC磷酸化。动物实验显示糖尿病促进FeCl3诱导的颈动脉血栓形成,并且糖尿病大鼠血凝块收缩程度显著高于正常组大鼠。结论:我们的研究表明,血浆中的AGEs通过与血小板CD36结合激活下游Src/Syk-PLCγ2以及RhoA/ROCK通路诱导血小板激活。激活的血小板进一步诱导血凝块收缩。本研究揭示了 AGEs活化血小板的潜在机制。