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目的: 通过检测细胞凋亡率、活性氧含量和线粒体膜电位变化以及相关凋亡蛋白的相对表达水平，探讨MC-LR是否通过线粒体介导的caspase依赖性途径诱导睾丸支持细胞凋亡，为保护、预防和治疗MCs所致的生殖系统损伤提供科学依据。 方法: 1.原代细胞培养：从青春前期(日龄18-20d）雄性SD大鼠睾丸中提取、分离并纯化睾丸支持细胞，建立原代培养的睾丸支持细胞模型。 2.CCK-8实验：CCK-8试剂盒检测不同浓度MC-LR（0,1,5,10,20,40,60μg/ml）作用睾丸支持细胞24h后细胞增殖变化，并确定IC50，设置IC50/4、IC50/2、IC50为后续实验浓度。 3．实验分组：睾丸支持细胞分为：对照组（0μg/ml MC-LR）、IC50/4、IC50/2、IC50 MC-LR组和Caspase抑制剂zVADfmk（50μmol/L）+IC50 MC-LR组以及抗氧化剂NAC（10mmol/L）+IC50MC-LR组，继续培养24 h。 4.凋亡率检测：AnnexinV-FITC/PI双染联合流式细胞仪检测各处理组作用睾丸支持细胞24h后细胞凋亡率的变化。 5.活性氧检测：ROS试剂盒联合荧光显微镜以及流式细胞仪分别检测不同浓度MC-LR和NAC+IC50 MC-LR作用睾丸支持细胞24h后细胞内ROS荧光值变化。 6.线粒体膜电位：JC-1试剂盒联合流式细胞仪检测不同浓度MC-LR和NAC+IC50 MC-LR作用睾丸支持细胞24h后细胞线粒体膜电位变化。 7.蛋白检测：利用Western Blot法检测不同浓度各处理组作用睾丸支持细胞24h后细胞内细胞色素C、Caspase-9、Cleaved-Caspase-9以及Caspase-3蛋白相对表达量变化。 结果: 1．CCK-8检测结果：不同浓度MC-LR（0,1,5,10,20,40,60μg/ml）作用睾丸支持细胞24h后，细胞增殖受到明显抑制，且随着MC-LR浓度升高，细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05）。经计算MC-LR作用睾丸支持细胞24h IC50为32μg/ml，后续实验浓度为：8μg/ml,16μg/ml和32μg/ml。 2.凋亡率检测结果：MC-LR能诱导睾丸支持细胞凋亡，凋亡率分别为：3.900％±0.200%、6.00%±0.100%、27.266%±0.115%，随着MC-LR浓度升高，细胞凋亡率显著升高（P<0.05）。 3．活性氧检测结果：MC-LR能增加睾丸支持细胞内ROS含量。荧光显微镜观察显示：随着MC-LR浓度升高，细胞内荧光强度逐渐增强；流式结果显示：随着MC-LR浓度升高，荧光值明显升高，细胞内ROS含量显著增加(P<0.05)。 4.线粒体膜电位检测结果： MC-LR能降低睾丸支持细胞线粒体膜电位，且随着MC-LR浓度升高，线粒体膜电位显著降低（P<0.05）。 5.Western Blot检测结果：MC-LR能增加睾丸支持细胞Cyt-c、Caspase-9、Cleaved-Caspase-9以及Caspase-3的相对表达量，且随着MC-LR浓度升高，四种蛋白相对表达量显著升高（P<0.05）。 6．Caspase抑制剂zVADfmk预处理可使32μg/ml MC-LR组细胞凋亡率由27.266%±0.115%下降至9.633%±0.057%（P<0.05），且能显著降低四种凋亡相关蛋白的相对表达量（P<0.05）。 7.抗氧化剂 NAC预处理可使32μg/ml MC-LR组细胞凋亡率由27.266%±0.115%下降至13.200%±0.100%（P<0.05），且明显降低细胞内ROS含量、抑制线粒体膜电位降低以及降低四种凋亡相关蛋白的相对表达量（P<0.05）。 结论: 1.微囊藻毒素-LR在一定浓度范围内可明显抑制睾丸支持细胞的增殖，并诱导其凋亡。 2.线粒体介导的Caspase依赖性途径可能是微囊藻毒素-LR诱导睾丸支持细胞发生凋亡的主要途径之一。 3.活性氧参与了微囊藻毒素-LR诱导睾丸支持细胞凋亡过程。