目的:顺铂,作为一种广泛应用的化疗药物,可治疗多种恶性肿瘤。顺铂导致的副作用发生率高且反应程度重,其中耳毒性明确涉及到内耳器官的广泛不可逆损伤,包括耳蜗毒性和前庭毒性。目前基本没有FDA批准的用于治疗顺铂引起的听力损失的药物。因此寻找有效的抗顺铂的耳保护药物非常重要。目前有研究认为顺铂所致的听力损失可能与其诱导耳蜗毛细胞内氧化应激反应,导致细胞内氧化应激产物（ROS）蓄积相关。5,7-二羟基-4-甲基香豆素（D4M）能够清除自由基,在人体血液系统当中,在抗氧化、抗凝血方面有着广泛的应用。这项工作基于其抗氧化作用,旨在探究D4M对顺铂所导致的耳毒性的影响以及其保护机制。方法:首先,此实验分组设计,分为对照组（CON）、顺铂组（CIS）、药物保护组（D4M+CIS）。1、用CCK-8试剂盒法测定细胞活力。分别确定顺铂（CIS）的损伤模型;并且在这个损伤模型的基础下,确定化合物5,7-二羟基-4-甲基香豆素（D4M）对HEI-OC1细胞的保护作用以及最佳保护浓度。2、Annexin V-FITC和PI用于细胞凋亡检测。细胞活性氧水平通过MitoSOX Red和Cell ROX Green探针检测测定。用TMRM染色分析线粒体膜电位。基底膜毛细胞中活性氧水平通过MitoSOX Red探针检测测定。3、免疫荧光用于毛细胞和螺旋神经节神经元的检测。通过cleaved caspase-3和TUNEL染色来评估基底膜毛细胞的细胞凋亡相关蛋白。4、通过蛋白免疫印迹实验检测JNK、p-JNK、FoxO1、p-FoxO1的表达,通过免疫组化确定FoxO1的细胞内定位。结果:1、D4M能够保护毛细胞免受顺铂诱导的损伤,提高了House Ear Institute Organ of Corti1（HEI-OC1）细胞和新生小鼠耳蜗外植体的细胞活力。2、在新生小鼠的耳蜗中证实,D4M对顺铂导致的耳毒性有保护作用。3、D4M显著抑制HEI-OC1细胞以及耳蜗中顺铂诱导的ROS。4、蛋白免疫印迹结果表示:D4M显著下调p-JNK,并提高p-FoxO1/FoxO1的表达比例,从而减少顺铂诱导的胱天蛋白酶依赖性细胞凋亡。同时,CCK-8结果显示茴香霉素诱导的JNK信号传导显著减弱了D4M对HEI-OC1细胞的保护作用。结论:顺铂处理HEI-OC1细胞以及耳蜗组织会导致细胞凋亡增加,激活氧化应激反应,导致细胞内ROS堆积。在预处理运用5,7-二羟基-4-甲基香豆素（D4M）后,细胞凋亡和氧化应激反应明显降低,HEI-OC1细胞以及耳蜗中的毛细胞、神经元细胞存活增多,且形态对比损伤组（CIS）更加完整,D4M通过调节JNK/FoxO1信号通路来抑制顺铂导致的耳毒性损伤,同时,这项研究还支持了D4M可以被用作一种新化合物,来预防顺铂相关听力损失的作用。