降解亚硝酸盐菌株的筛选及生物学特性的研究

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近年来,我国水产养殖业发展迅速,养殖密度和规模不断增大,导致养殖水体污染严重,这其中又以氨氮和亚硝酸盐的危害较大。而目前采用的处理养殖水体水质污染的方法都存在一些弊端,在处理净化水质的同时,往往都会对养殖的生态环境有所破坏。利用微生物具有降解亚硝酸盐的能力,本研究拟从水体环境中筛选出一株对亚硝酸盐具有高降解活力的安全菌株,用于消除养殖水体中残留的亚硝酸盐,为我国淡水养殖业的健康发展,探索一条绿色的、可持续性发展的途径。本研究采集了四川养殖池塘、湖泊以及污水沟的水样和泥样,进行富集培养后,共分离纯化到42株菌,选择了其中降解效果较好的7株菌进行复筛,最终得到1株对亚硝酸盐具有较高降解能力而且效果稳定的菌株,经鉴定为蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus),命名为SZ-3。经降解条件的单因素优化试验发现,SZ-3菌株的最佳降解条件是:pH值为7,温度为33℃,降解需要的最低葡萄糖含量为1/10000。在水族缸中降解亚硝酸盐的模拟试验中,污水50L、水温为28±1℃,葡萄糖含量为1/10000,接种500mL 1×10~9cfu/mL的SZ-3,亚硝酸盐浓度分别为2mg/L、5mg/L和10mg/L试验组,5d的降解率分别为86.96%、80.92%和61.70%,10天的降解率分别为98.55%、87.79%和74.89%。在模拟污染水体的养殖试验中,污染水体100L,水温为26±3℃,亚硝酸盐浓度为5mg/L,接种1000mL1×10~9cfu/mL的SZ-3菌株,1-4d的亚硝酸盐降解率分别是49.33%、79.45%、88.35%和91.78%。溶血性试验表明,SZ-3菌株无溶血性。对30尾6-8cm彭泽鲫鱼种,在含SZ-3菌株1×10~9cfu/mL浓度下饲喂15d,鱼体生长发育正常,无发病和死亡现象,可判断SZ-3菌株在淡水水产养殖中的应用是安全的。SZ-3菌株在室温避光条件下保存120d,性状稳定。用平板稀释法测定其活菌数高达1.40×10~9cfu/mL,芽孢复活率为79.55%。对SZ-3菌株降解蛋白酶、产酶条件及酶活性研究发现,酶的分子量为22.993Kd,最适产酶温度为30℃,最适产酶pH值为7。菌株在28℃,水域振荡培养72h,产酶量达到最高,其酶活力为682.139IU。
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