【摘 要】
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水稻是世界上最重要的粮食作物之一,但是水稻每年因虫害(尤其是螟虫和稻飞虱)大量减产,损失重大。由于Bt基因具有特异性,转单个Bt基因害虫容易产生抗性。为了进一步提高水稻
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水稻是世界上最重要的粮食作物之一,但是水稻每年因虫害(尤其是螟虫和稻飞虱)大量减产,损失重大。由于Bt基因具有特异性,转单个Bt基因害虫容易产生抗性。为了进一步提高水稻的抗虫性、扩大水稻的抗虫范围,双价抗虫水稻的培育具有重要的意义。本实验利用抗鳞翅目害虫基因cry1Ab与cry1Ca,以及抗同翅目害虫基因cry30Fa1,构建了两个植物双T表达载体pCDMAR-U30AAb和pCDMAR-UAbACa。通过农杆菌介导法转化“闽恢3301”,分别获得了 152和121个T0代克隆植株。对T0代转基因植株进行PCR检测:152个转pCDMAR-U30AAb植株中目的基因阳性数为28,Hy 阳性数为150,共转化率为18.4%;121个转pCDMAR-UAbACa植株中目的基因阳性数为33,Hyg阳性数为118,共转化率为27.3%;同时通过Southern杂交和绝对定量Real-Time PCR分析表明外源基因多以单拷贝插入水稻基因组中。半定量RT-PCR和相对定量Real-Time PCR分析表明转基因阳性植株中cry1Ab、cry1Ca和cry30Fa1基因的mRNA转录正常且转录水平较高。E1isa法测定T0代转基因植株中Cry 1Ab蛋白含量显示Cry1Ab蛋白的表达量占叶片可溶性蛋白总量的百分比为0.260%-0.954%。植株田间农艺性状良好。
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