银杏叶提取物(Ginkgo Biloba extract, GBE)是以中药银杏叶为原料提取的有效成分。主要成分为总黄酮苷,萜类内酯。其中槲皮素、山柰素、异鼠李素是黄酮苷的三种主要苷元,对心脑血管疾病,高血脂,高血压,清除氧自由基具有显著的疗效；萜类内酯包括银杏内酯A、B、C、M、J,和白果内酯,为强效血小板活化因子(PAF)拮抗剂,能降低血黏度,改善血液流动性。近来研究表明,GBE可改善认知功能减退及治疗老年性痴呆。老年痴呆(senile dementia, SD)[3]是指老年期出现的已获得的智能在本质上出现持续的损害,也就是由器质性脑损害导致的基本上不可逆的智能缺失和社会适应能力降低。其发病机制非常复杂,可能与胆碱能、单胺能、神经肽能等多种递质和调制物的功能障碍有关。GBE目前临床上给药途径为静脉和口服制剂。口服给药虽然方便,但存在严重的首过效应,生物利用度低。皮下注射疼痛且不宜自主用药。因此,研制一种有效,便捷的给药途径是提高脑内浓度、增强治疗作用的一个选择。鼻腔给药是近年来研究最多的给药途径之一,不仅具有药物吸收迅速,无首过效应,给药方便等优点,而且还具有向脑内递药的特性,因而有望提高GBE的脑内浓度,增强对老年痴呆的防治效果。中药鼻腔给药的现代剂型以滴鼻剂为主,但由于鼻腔粘液分泌及纤毛运动,使药物在鼻腔中滞留时间短,生物利用度降低。因此,本课题拟将GBE制成鼻腔原位凝胶剂,考察离体黏膜吸收作用以及评价其给药后的体内药物动力学性质,为GBE临床应用提供有效便捷的新制剂。主要研究内容：1 GBE体外分析方法的建立建立HPLC-UV法测定GBE中TFG的含量。Agilent C18色谱柱,流动相为甲醇：0.4%磷酸溶液(50：50,v/v)；流速：0.8mL·min-1;检测波长：360 nm；柱温：30℃：进样量：20μL。建立HPLC-ELSD法测定GBE中萜内酯含量。依利特C18色谱柱,流动相：甲醇：四氢呋喃：水(25：10:65,v/v)；流速：0.6 mL·min-1;载气(N2)流速：2.7L·min-1;柱温：35℃；漂移管温度：115℃。2银杏叶鼻用原位凝胶剂的处方筛选分别以粘度粘附力为指标,carbopol 934、HPMC为载体制备原位凝胶,结果以0.8% carbopol 934和1.5% HPMC为最佳。银杏叶提取物在水中属于极微溶解。本研究采用相溶解度法,考察GBE在不同体积分数的HP-(?)-CD下相溶解度。其余辅料以鼻纤毛毒性小,不影响药物稳定性为原则确定处方。3银杏叶鼻用原位凝胶剂的制备工艺研究室温下取银杏叶提取物4.5 g,加入已用重蒸馏水溶解的HP-(?)-CD溶液,不断搅拌溶解,加入处方剂量的其他组分,搅拌使溶解,加入HPMC1.5 g,使之水化溶胀,再将卡波姆9340.8 g溶解其中搅拌约24 h,使之充分溶胀。用1mol·L-1 NaOH溶液调节pH至4.3。4促吸收剂对GBE-ISG吸收的影响采用离体羊鼻黏膜,使用Franz扩散池,选择1%吐温-80、0.5%冰片、1%氮酮,而后分别进行鼻黏膜吸收试验。结果,3种促渗剂黏膜渗透速率为：1%氮酮>1%吐温>0.5%冰片。随氮酮浓度的增大,药物黏膜吸收逐渐增加,吸收过程符合Weibull动力学方程。5银杏叶鼻用原位凝胶剂的安全性评价采用在体蟾蜍上颚模型考察银杏叶鼻用凝胶剂及辅料对纤毛运动的影响,从而评价制剂的鼻黏膜毒性。结果表明,银杏叶鼻用凝胶剂和辅料均无不良影响。6银杏叶鼻用原位凝胶剂的初步稳定性考察制备3批GBE-ISG制剂,进行初步稳定性试验(耐热试验、光照试验、高湿度试验),初步确定本品可在室温下保存。7银杏叶原位凝胶在兔体内的药代动力学研究建立了HPLC法测定槲皮素血药浓度。采用Agilent C18色谱柱(250 mmx4.6mm,5μm)；流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(60：40,v/v)；检测波长为368 nm ;进样量为20μL。经方法学评价,提取回收率、方法回收率和精密度均符合生物样品测定要求。测定了6只家兔口服银杏叶片和鼻腔给药GBE-ISG后血浆中槲皮素的浓度,计算药代动力学参数。结果,银杏叶鼻用原位凝胶剂和片剂的体内过程均符合单室模型,银杏叶鼻用原位凝胶剂的Tmax约为1.22 h,Cmax约为779.30μg·L-1；而对照组银杏叶片剂的Tmax约为1.92h,Cmax约为452.79μg·L-1,其相对生物利用度为77.52%。结论：本实验以银杏叶提取物制备鼻用pH敏感型原位凝胶,其处方设计合理、制备工艺可行,便于质量控制,释药性良好、稳定性良好、纤毛毒性小,吸收快,基本达到了实验设计的目的。