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以MDV疫苗作载体构建活病毒载体疫苗是近年来禽病毒基因工程研究中比较活跃的领域。多年的生产实践证实了MDV疫苗作为活病毒载体的安全性、有效性。传染性法氏囊病(Infectious bursal disease, IBD)是由鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)引起的鸡和火鸡的一种高度接触性传染病。常规疫苗特别是中等毒力活疫苗免疫鸡群是控制IBD的主要方法。然而疫苗造成的免疫抑制,使得鸡群易发其他疫病以及鸡群对其他疫苗的效果降低。为此,本研究选用CVI988疫苗作载体,插入IBDV VP2保护性抗原基因,构建重组病毒,为重组马立克氏病毒基因工程疫苗的深入研究奠定基础。1 MDV CVI988通用转移载体的构建根据I型MDV强毒GA株基因序列,设计两对引物,以病毒感染鸡胚成纤维细胞中提取的病毒基因组总DNA为模板,用PCR方法扩增出CVI988/Rispens株的US10区及其侧翼US1和sorf3序列,分别克隆入pGEM-T easy载体中,阳性质粒分别命名为T-US10L,T-US10R,经测序表明所克隆的基因片段与I型MDV强毒GA株基因序列完全一致。然后将US10R片段插入pUC18载体中,构建成功pUC18-US10R质粒,再将US10L片段插入pUC18-US10R质粒中,构建成功pUC18-US10质粒。根据pcDNA3.1载体序列,设计1对引物,扩增跨幅为1.0kb,包含CMV启动子和polyA的多克隆位点基因表达盒,克隆入pGEM-T easy载体中,阳性质粒命名为T-MCS,进一步将此多克隆位点基因表达盒插入上述pUC18-US10质粒,构建成功马立克氏病病毒CVI988通用转移载体质粒pUC18-US10-MCS。实验结果表明本研究构建的pUC18-US10-MCS通用转移载体质粒正确,拥有多个可利用的单一常用酶切位点,为构建马立克氏病毒重组基因工程疫苗奠定了基础。