扫描激光诱导荧光显微镜的构建及其负反馈模式检测基底形貌

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第一章中对几种扫描显微镜作了简要的综述。主要从原理、应用、特性以及局限性等方面对扫描电子显微镜(SEM)、扫描隧道显微镜(STM)、原子力显微镜(AFM)、扫描近场光学显微镜(SNOM)、扫描电化学显微镜(SECM)、共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)等几种扫描显微镜作了简要介绍。本章共引用文献72篇。第二章中我们设计了一种新的扫描探针显微镜——扫描激光诱导荧光显微镜(SLIFM),并自己组装了一套新仪器。本仪器分为三部分:激光诱导荧光扫描系统,高灵敏的荧光检测系统,用于控制激光诱导荧光扫描系统、收集荧光信号、处理数据的软件系统。我们将光纤的一端固定在显微镜物镜的聚焦点上,另一端作为光探头固定在由三维马达和压电驱动器构成的三维操纵器上。通过计算机中软件控制三维操纵器使光纤探头在研究对象上方沿X、Y、Z轴方向以微米尺度移动,通过检测器(PMT)收集信号,利用CHI910B软件对研究对象进行分析检测。利用该仪器我们得到了光纤向盛有荧光物质的检测池基底移动时的逼近曲线,表征了微池中液面的形貌及微池的大小,测得的结果与实际大小一致,另外还对固定在基底上的HRP酶点的形貌进行了表征。第三章中我们制作了一种在光纤检测端固定有酶分子的酶探头,并以这种酶探头对溶液中底物的催化反应为基础构建了扫描激光诱导荧光显微术的负反馈扫描模式。这种对光纤进行修饰并可以对基底进行检测的光学探头,在其他的扫描探针显微镜中还未曾报道过。我们在光纤的端面上通过硅烷化的方法修饰了HRP分子制成可以导光的酶探头,HRP可以催化溶液中ADHP和H2O2反应生成荧光物质试卤灵(Resorufin),利用此催化反应得到了酶探头向盛有ADHP和H2O2溶液的检测池底部移动时的负反馈模式逼近曲线,并利用负反馈模式对在玻璃基底上刻蚀的凸起的直线、倒“U”形线,及“S”形线进行了表征,得到了图形的形貌图,并通过逼近曲线及对刻蚀的基底作的线扫描曲线可以测量出基底上凸起线形的高度和宽度,测量得到的数据与实际大小相一致。
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