功能化聚合物微球的制备及其在转基因检测中的应用

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尽管转基因作物具备抗虫害、抗除草剂、高产等优良的特性,但人们一直没有对它的安全性达成共识,许多国家都要求食品具有表明转基因成分与含量的标签。目前,最常见的转基因检测方法包括聚合酶链式反应(PCR)和荧光实时定量PCR(FQ-PCR)。PCR技术通过扩增标记基因、启动子基因和终止子基因可实现快速有效的转基因成分定性、定量检测。另一方面,随着科学技术的不断进步,出现了流式细胞仪、液相芯片等一系列具有更高通量的转基因检测新手段。转基因的检测离不开两大关键步骤,即核酸提取和核酸检测。而现今的常规技术存在一些难以克服的困难。第一,提取植物基因组的经典方法通常需要使用有机溶剂多次抽提和离心,不仅污染环境,费时费力,不易实现自动化,而且易造成有机溶剂残留,从而限制后续生物检测。第二,作为检测载体的功能化微球,制备步骤繁琐,常需要多步反应得到。针对以上的问题,本文首先采用无皂乳液聚合法制备了一种粒径小,分散性较好,磁性强的包埋式磁性聚合物微球。将其用于马铃薯类深加工食品的DNA提取中,对深加工食品这一类核酸丰度较低的样品的DNA提取方法进行了研究,并通过常规PCR和FQ-PCR考察了该方法获得的基因组核酸的纯度与产率。通过将制备的磁性微球以及提取方法与CTAB法、商品化试剂盒相比较,进一步探讨了该方法的有效性,探讨了各种深加工食品的DNA提取方法的优点与缺点,针对性与普适性。随后,将这种磁性微球表面偶联寡核苷酸探针,通过探针捕获实现了目标片段有效而特异性地检测。本文通过三聚氰胺与甲醛的共缩聚反应,制备了一种单分散、亲水性、表面富含氨基的包埋式荧光聚合物微球。将这种荧光微球表面结合特异性核酸探针,通过编码荧光微球的探针捕获可在同一时间实现转基因成分的定性、定量测定,为液相芯片的快速、高通量转基因检测打下了坚实的基础。最后,本文通过改进无皂乳液聚合法,制备了一种包埋式磁性荧光双功能化的聚合物微球,通过将其应用于转基因片段的探针捕获检测中,对编码磁性荧光微球的制备及应用进行了初步探索。综上所述,本文制备的磁性微球、荧光微球、荧光磁性微球,不仅可以作为基因组DNA的固相吸附载体,更可在DNA的研究和检测中实现快速分离和高通量分析,对转基因检测工作具有重要的意义。
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