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胶质瘤是一类常见的原发性脑内肿瘤,占颅内原发肿瘤的50%以上,治疗困难。胞嘧啶脱氨酶(Cytosine deamimase, CD)基因和骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells, BMSCs)是近年被广泛关注的肿瘤治疗基因和细胞载体,通过BMSCs作为载体将CD基因携带至脑胶质瘤细胞周围,使其发挥化疗前药的转化作用,对于胶质瘤的治疗有重要价值。本文首先构建pIRES2-AcGFP1-CD真核表达载体,实验成功克隆了CD基因,基因测序结果同Genbank中公布的序列一致。将CD基因亚克隆到pIRES2-AcGFP1质粒上,构建了pIRES2-AcGFP1-CD真核表达载体。本文利用脂质体介导法将CD基因转染兔及小鼠BMSCs,结果表明pIRES2-AcGFP1-CD真核表达载体成功转入BMSCs中。本文还尝试应用慢病毒包装CD基因转染BMSCs。实验构建的CD慢病毒载体其转染及表达能力可以满足离体和整体实验的需求,并在实验中成功地构建了携带CD基因的小鼠BMSCs (BMSCs-CD/eGFP),并经过基因测序和PCR检测证实,慢病毒载体介导的CD基因能够转染BMSCs,其转染效率远远高于脂质体介导法,因此,本文的后续实验中均采用慢病毒介导CD基因转染小鼠BMSCs。成功获得稳定表达CD基因的小鼠BMSCs后,将转染了CD基因的BMSCs与胶质瘤细胞共培养,培养液中加入5-FC后通过流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡,结果发现,转染了CD基因的BMSCs能有效地将化疗前药5-FC转化为具有细胞毒性的化疗药物5-FU,并在体外对胶质瘤细胞表现出显著的生长抑制作用。随后,利用先期实验构建成功的携带CD基因的BMSCs原位接种治疗大鼠C6脑胶质瘤模型,然后腹腔注射5-FC观察其对胶质瘤细胞的生长抑制作用。大鼠胶质瘤原位模型构建后7～10天大鼠开始出现突眼、偏瘫等颅内高压症状,通过磁共振扫描证实大鼠脑内肿瘤形成。我们选择建模第7天开始腹腔注射5-FC。结果发现,BMSCs-CD/eGFP协同5-FC后可以明显改善大鼠的平均生存期；通过定期行磁共振扫描观察,治疗组肿瘤生长速度相对于对照组明显减慢；HE染色发现治疗组肿瘤发生了坏死、出血等变化,而对照组则较少出现。同时以eGFP作为示踪剂标记BMSCs,观察其在肿瘤组织内的分布,结果表明BMSCs-CD/eGFP细胞分布于C6胶质瘤组织的内部和边缘部位,且主要分布于胶质瘤不规则形状的边缘,呈包绕状分布。将分子生物学技术与形态学手段相结合,利用转基因技术将CD基因通过携带增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的慢病毒载体导入小鼠的BMSCs,在体内、体外观察转染CD基因的BMSCs与5-FC系统治疗胶质瘤的情况。结果证明,BMSCs可向胶质瘤细胞迁移；转染CD基因的BMSCs与5-FC系统在体内、外均可抑制大鼠胶质瘤细胞生长,延长大鼠生存期。