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研究目的:脂筏是膜脂双层内富含胆固醇和鞘脂的微区,目前公认的脂筏功能是参与信号转导、受体介导的内吞作用以及胆固醇代谢运输等。近年来的研究发现脂筏参与了B淋巴细胞的成熟和活化过程,本文通过观察比较年轻小鼠和年老小鼠B细胞表面脂筏的表达情况,探索衰老对B细胞脂筏结构和功能的影响;并研究了体外纯化培养B淋巴细胞的适宜条件。方法:1将2-4月龄BALB/c小鼠随机分为正常年轻鼠组和高胆固醇年轻鼠组,18-24月龄BALB/c小鼠随机分为正常年老鼠组和高胆固醇年老鼠组。高胆固醇年轻鼠组和高胆固醇年老鼠组喂食高胆固醇饲料。正常年轻组和年老组小鼠给予正常饮食。2取小鼠脾脏制成单细胞悬液,染色后以流式细胞仪检测B淋巴细胞数目及亚群的变化、脂筏的表达情况、Ca2+变化水平。3用绵羊红细胞对四组小鼠进行体内免疫,以ELISA法检测B细胞分泌抗体情况及血清胆固醇水平。4体外分离培养小鼠脾脏细胞,随机分为7组,分别用白细胞介素4,CD3,脂多糖,白细胞介素4+CD3,白细胞介素4+脂多糖,CD3+脂多糖组进行干预、将未给予刺激的脾细胞作为对照组。用流式细胞仪检测在不同培养条件下小鼠脾脏细胞T、B淋巴细胞及其亚群的变化结果:1、流式细胞术检测结果:⑴衰老对B淋巴细胞亚群的影响:与年轻鼠组比较,年老鼠组总外周B细胞数目保持不变;过渡(transitional,TR)B细胞亚群的T1亚群和T2亚群数目比例均显著减少(P<0.01),T3亚群数目比例增加(P<0.01);B1细胞和滤泡(follicular,FO)B细胞数目比例并没有明显改变(P>0.05),边缘带(marginal zone,MZ)B细胞数目比例下降(P<0.01)。⑵衰老对B细胞膜上脂筏表达的影响:与年轻鼠组比较,胆固醇在年老鼠组的T1、T2亚群表达显著增加(P<0.0001),差异有统计学意义;而在T3亚群胆固醇的表达却显著降低(P<0.0001),差异有统计学意义;B1亚群的胆固醇表达增加(P<0.001);FO亚群胆固醇的表达无明显差异(P>0.05);MZ亚群胆固醇的表达明显减少(P<0.0001),差异有统计学意义。而GM1的表达却有所不同,由实验结果分析知100%的B220+B细胞均表达GM1。与年轻鼠组相比,GM1在年老鼠组TR、B1、FO、MZ亚群中的表达均显著降低(P<0.0001),差异有统计学意义。⑶衰老影响B细胞膜上Ca2+内流水平:与年轻鼠组比较,年老鼠组Ca2+内流水平降低。2、ELISA实验结果⑴衰老对血清中胆固醇水平的影响:与年轻鼠组相比,年老鼠组和高胆固醇年轻鼠组的血清胆固醇水平明显升高(P<0.05),差异有统计学意义;而年老鼠组的血清胆固醇水平与高胆固醇年老鼠组相比,未见明显差异(P>0.05);高胆固醇年轻鼠组与高胆固醇年老鼠组的血清胆固醇水平无明显差异(P>0.05)。⑵衰老对血清中抗体水平的影响:与年轻鼠组相比,年老鼠组的IgM效价显著升高,而IgG的效价却明显降低;高胆固醇年轻鼠组IgM的效价没有显著差异,而IgG的效价增高,但分泌高峰期却延后。3、体外培养脾脏细胞实验结果:与对照组比较,白细胞介素4组淋巴细胞在培养后第3-5天数量达到高峰;脂多糖组在培养初期无明显作用,第3天开始淋巴细胞数量有明显的增加,第5天达到高峰;培养体系中加入CD3单克隆抗体,可导致T淋巴细胞消失,培养2 d后,可得到较为单一的B淋巴细胞,其细胞数量在第3天达到高峰。其中B220+IgD+成熟B淋巴细胞亚群数量显著增加。体外培养24 h后,各组B220+CD93+Transitional B淋巴细胞亚群均完全消失。结论:衰老使小鼠B淋巴细胞脂筏结构发生改变,导致脂筏信号转导功能受限;体外培养的小鼠脾脏细胞加入CD3单克隆抗体和白细胞介素4可以去除T淋巴细胞,并维持成熟B淋巴细胞的生存和增殖。