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口腔颌面部最常见的恶性肿瘤之一就是舌鳞状细胞癌(tonguesquamouscellcareinoma,TSCC),该病患者中男性比女性多见,由于舌体特殊的位置和其所担任的重要功能,一旦受损,将给患者的生活生存质量带来极大的挑战。目前,对于肿瘤的研究多集中于肿瘤标记物和治疗靶点的寻找。钾通道(potassiumchannel)是细胞膜上一类分布最广,类型最多的离子通道,其中的电压门控型钾通道(voltage-gatedK+channels,Kv)广泛存在于兴奋性和非兴奋性细胞的细胞膜上,且参与了多种细胞的生理功能,对多种细胞的增殖、周期以及凋亡都有一定的影响。4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)是一类电压门控型钾通道阻滞剂,可以选择性的阻断Kv通道。多项研究表明,4-AP可以抑制多种肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并参与细胞周期的调控。目的:本实验采用CCK-8法检测4-AP对人舌鳞癌细胞株Tca8113细胞的增殖影响,流式细胞术检测4-AP对人舌鳞癌细胞周期的调控及细胞凋亡率的检测,意在研究4-AP对人舌鳞癌Tca8113细胞生长的影响,探寻4-AP对该细胞生长影响的可能的机制,以期为人舌鳞癌的预防、诊断和治疗提供可靠的理论依据。 方法:1.采用CCK-8法检测浓度为1,5,10,20,50,100mmol/L的钾离子通道阻滞剂4-AP分别作用于人舌鳞癌Tca8113细胞12h,24,48h后,酶标仪检测各组细胞的OD值,计算各浓度4-AP在不同时间对Tca8113细胞的增殖抑制率;2.浓度为5,10,20,50mmol/L的4-AP干预人舌鳞癌Tca8113细胞24h后,70％酒精固定细胞12h,流式细胞术(Flowcytometry,FCM)检测各组细胞周期;3.浓度为5,10,20,50mmol/L的4-AP作用于人舌鳞癌细胞24h后,AnnexinV-FITC和PI双染,同样采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率改;4.所有资料采用SPSS19.0软件进行数据分析,所有实验数据用()表示,各组间比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA),P<0.05差异有统计学意义。 结果:1.倒置相差显微镜下观察可见,随着4-AP的浓度和干预时间的增加,Tca8113产生细胞体积减小,细胞固缩变圆,细胞染色质凝集,细胞内出现较多空泡等一系列细胞形态的改变。2.4-AP对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖有抑制作用,采用单因素方差分析(One-wayANOVA)显示,当浓度分别为1,5,10,20,50和100mmol/L的4-AP干预Tca8113细胞培养12h后,细胞的增殖抑制率相对于阴性对照组分别为0.65%,1.48%,2.98%,6.43%,23.57%和47.26%,差异具有显著性(P<0.01);当干预细胞24h后,细胞增殖抑制率分别为0.76%,8.40%,10.64%,13.30%,36.95%和74.50%,差异具有显著性(P<0.01);而当药物干预达到48h后,细胞增殖抑制率则分别为1.01%,6.69%,30.16%,72.45%,79.33%和80.15%,差异具有显著性(P<0.01)。对不同作用时间同一浓度4-AP对各组Tca8113细胞增殖抑制率做统计学处理,结果显示4-AP对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制作用在各组间除了浓度为1mmol/L的浓度组(P>0.05)外均具有显著性差异(P<0.01)。3.浓度为5,10,20,50mmol/L的4-AP作用于人舌鳞癌Tca8113细胞24h后,GO/G1期的细胞所占的比例由对照组的49.60%上升至71.73%,具有显著性差异(P<0.01);S期细胞所占的比例由对照组的40.97%降至17.03%,具有显著性差异(P<0.01);以上结果提示4-AP阻滞Tca8113细胞于G0/G1期。4.流式细胞仪检测浓度为5,10,20,50,100mmol/L的4-AP作用于人舌鳞癌Tca8113细胞24h后细胞凋亡率,结果显示浓度为5,10,20,50mmol/L4-AP组细胞凋亡率分别为6.79%,6.34%,7.28%,7.39%,与对照组的7.08%相比较,差异没有统计学意义(P>0.05);浓度为100mmol/L组细胞肉眼可见大量漂浮细胞,仅存极少数贴壁细胞,细胞浓缩呈圆形,可见较多细胞碎片,流式细胞仪检测其凋亡率为35.01%,明显高于其他实验组,具有显著性差异(P<0.01)。 结论:1.4-AP对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖有抑制作用,这种作用呈时间浓度依赖关系。2.4-AP对人舌鳞癌Tca8113细胞周期分布有影响,阻滞细胞于G0/G1期,4-AP可能参与了该细胞周期的调控。3.4-AP可诱导人舌鳞癌Tca8113细胞发生凋亡。