苗药复方二岩虎果汤药效学及拆方研究

来源 :贵阳医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:poppytao
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目的: 本研究的目的在于通过实验研究确定二岩虎果汤的药效及其药效基础上的最佳处方,优化最佳提取方法,为进一步开发出新型治咳喘的药物奠定实验基础。  方法: 采用小鼠浓氨水引咳法观察二岩虎果汤的止咳作用,采用酚红排泌法观察其祛痰作用,采用豚鼠0.1%磷酸组胺和2%氯化乙酰胆碱等量混合液(1∶1)引喘法观察其平喘作用,采用二甲苯致小鼠耳肿胀法观察其抗炎作用;采用最大耐受量试验,对二岩虎果汤的安全性进行初步评价;选择小鼠止咳(浓氨水引咳法)、抗炎(二甲苯致小鼠耳肿胀法)两项药理指标,考察二岩虎果汤的水、35%、55%、75%和95%乙醇五种提取溶剂提取物的药效,选择适宜的提取溶剂;采用撤药分析法对二岩虎果汤进行拆方研究,比较各配伍组方对小鼠的止咳、抗炎药理作用,观察各味药对整方药效的影响;利用正交试验设计,对二岩虎果汤进行拆方研究,选择L16(45)正交表,以二岩虎果汤中4味药为因素,分别选取原方药量的0、0.5、1、1.5倍量构成4个水平,对所得16个处方分别进行止咳、抗炎药理实验,探讨二岩虎果汤配伍机制;使用高效液相色谱法,Diamonsil(R)钻石 C18柱(5μm,250×4.6 mm),甲醇:水(50:50)为流动相,流速为1.0ml·min-1,柱温30℃,检测波长330nm,建立二岩虎果汤中石吊兰素的含量测定方法;采用正交设计法,以浸膏得率和石吊兰素含量为指标,优化二岩虎果汤的水提醇沉工艺,并对其止咳、抗炎作用进行药效学验证。  结果: 二岩虎果汤高、中剂量组能延长小鼠咳嗽潜伏期,高、中、低三个剂量组均能降低小鼠3min内咳嗽次数(P<0.05);二岩虎果汤高、中剂量组能增加小鼠气管酚红排泌量( P<0.05);二岩虎果汤高、中、低三个剂量组均能延长豚鼠咳喘潜伏期(P<0.05);二岩虎果汤高、中、低三个剂量组均能降低小鼠耳肿胀率( P<0.05)。最大给药量试验结果表明:二岩虎果汤小鼠灌胃最大给药量为160 g·kg-1·d-1,按此量计算相当于临床成人口服一日等效剂量的80倍;二岩虎果汤小鼠腹腔注射最大给药量为40 g·kg-1·d-1。经提取溶剂筛选,组方适宜提取溶剂为55%乙醇;经撤药拆方研究,方中各药均对全方延长咳嗽潜伏期、减少咳嗽次数、降低小鼠耳肿胀率作用有贡献,其作用强弱顺序为:岩豇豆>岩白菜>果上叶>虎杖;通过正交拆方试验配合多指标综合评价,各味药对综合药效的影响大小是:A(岩豇豆)> B(岩白菜)> C(虎杖)> D(果上叶),由方差分析及直观分析综合得出二岩虎果汤的最佳配比为A4B4C3D2,即岩豇豆45g、岩白菜45g、虎杖30g、果上叶15g。经高效液相色谱法考察,石吊兰素在5—25μg/ml范围内成良好线性关系,r=0.9997,平均回收率为99.72%。二岩虎果汤的吸水率考察结果显示,浸泡时间为75min,吸水率为1.5倍;水提工艺的结果显示,各因素对水提结果的影响大小为:C(提取时间)>A(加水量)>B(提取次数),确定最优提取方法为A2B1C1,即加水量10倍,提取1次,每次1h;醇沉工艺的结果显示,各因素对醇沉结果的影响大小为:B(醇沉浓度)>A(药液浓缩比例)>C(静置时间),确定最优提取方法为A3B2C1,即提取液浓缩至药液比例为2:1,醇沉浓度为75%,静置12h;药效学验证结果显示,该水提醇沉法制备的药液能延长小鼠咳嗽潜伏期、减少咳嗽次数、降低小鼠耳肿胀率( P<0.05),与原提取方法相比,无显著性差异(P>0.05)。  结论: 二岩虎果汤具有止咳、祛痰、平喘、抗炎作用;小鼠急性毒性试验未见任何明显不良反应。经过撤药分析,该方组方合理,方中各药配伍关系为:岩豇豆为君药,岩白菜为臣药,果上叶、虎杖为佐使药;经过处方筛选,岩豇豆45g、岩白菜45g、虎杖30g、果上叶15g为最佳处方。本实验高效液相色谱法操作简便、快捷、准确,可用于二岩虎果汤中主要活性成分石吊兰素的含量测定。该水提醇沉提取工艺可行,为后期二岩虎果汤的制剂研究提供了实验依据。
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