本研究分为三个部分：一、细胞内乙型肝炎病毒cccDNA定量检测方法的建立；二、氧化苦参碱对HepG 2.2.15细胞内乙型肝炎病毒cccDNA含量的影响；三、慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞内cccDNA的检测。 一、细胞内乙型肝炎病毒cccDNA定量检测方法的建立 目的 建立细胞内乙型肝炎病毒cccDNA的定量检测方法。方法 以HepG2.2.15细胞为模型，消化、收集处于对数生长期的细胞，取1×10~6个细胞用小量质粒抽提试剂盒抽提细胞内的cccDNA，抽提产物用绿豆核酸酶酶切纯化，所得酶切产物用特异的引物和探针进行选择性荧光定量PCR检测。用对数生长期前的细胞培养上清、4份HBV DNA阳性和2份HBV DNA阴性的慢性乙型肝炎(轻度)患者血清验证荧光定量PCR法的特异性，并用不同浓度的质粒标准品检测该方法的敏感性。结果 证实HepG2.2.15细胞内存在cccDNA，在培养第7天的细胞内含量约为每个细胞18拷贝。对数生长期前培养上清和慢性乙肝(轻度)患者血清均未检测到荧光信号，本实验条件下用该方法可检测低至10~3拷贝／ml的cccDNA分子。结论 该方法可用于定量检测细胞内的乙型肝炎病毒cccDNA，操作方便，特异性高，敏感性较好。 二、氧化苦参碱对HepG2.2.15细胞内乙型肝炎病毒cccDNA含量的影响 目的 观察氧化苦参碱能否抑制或清除感染细胞内的乙型肝炎病毒cccDNA，探讨其抗乙型肝炎病毒作用的可能机制。方法 将2×10~5／ml的HepG2.2.15细胞分别接种于75cm~2培养瓶，每瓶12ml。接种后48小时，换用含不同药物浓度的培养液，包括氧化苦参碱1000μg／ml组、氧化苦参碱500μg／ml组、