流行性感冒病毒（influenza virus,简称流感病毒）是流行性感冒（influenza,简称流感）的病原体。流感一直是引起人类死亡的主要疾病之一,20世纪发生的4次全球性流感大流行给个人和社会造成无法估量的损失。而从1997年至今禽流感的肆虐更给人们敲醒了警钟。流感病毒易突变,虽然目前科学技术突飞猛进,但人类至今仍无法征服流感。高效及安全的疫苗接种是预防流感的有效手段。核酸疫苗作为第三代疫苗,与传统的灭活及减毒疫苗相比,其操作简单、安全有效、可大规模生产并能同时诱导机体产生体液及细胞免疫,因此成为流感疫苗的研究热点。美国国立卫生研究院（NIH）和WHO都强调核酸疫苗是流感疫苗的一个重要研究方向,流感病毒血凝素（hemagglutinin,HA）基因的研究正是该重要研究内容之一。流感病毒血凝素位于流感病毒包膜上,介导流感病毒吸附和穿入宿主细胞。HA是流感病毒最主要的表面抗原,它能够诱导机体产生相应的中和抗体以中和病毒的感染,产生免疫保护作用,因此血凝素在流感的诊断和防治中起重要作用。本研究以HA为靶点研制DNA疫苗。我们首先通过RT-PCR方法扩增了流感病毒A/New Caledonia/20/99（H₁N₁）的HA基因并克隆入真核表达载体pVAX1中,构建了DNA疫苗pVAX1/HA,为进一步研究其免疫效力奠定了基础。为了确认所构建的DNA疫苗是否可在真核细胞中表达HA抗原,我们将DNA疫苗转染入293T细胞中,并通过免疫荧光染色检测HA的表达,结果显示,在转染了pVAX1/HA质粒的细胞中可见绿色荧光,而转染空质粒pVAX1及未转染质粒的293T细胞均未出现荧光。此结果提示,DNA疫苗pVAX1/HA可在真核细胞中表达HA抗原。为了进一步研究注射DNA疫苗后,机体内HA蛋白的组织分布及其免疫原性,大量制备HA抗原及抗HA抗体是十分必要的。因此我们构建了pET-28a（+）/HA原核表达载体,并在大肠杆菌BL21中通过IPTG诱导表达,然后利用凝胶过滤层析对重组蛋白进行纯化。用纯化的带组氨酸标签的HA蛋白免疫新西兰兔,制备了抗HA蛋白的多克隆抗体,并通过间接ELISA方法检测了此多克隆抗体的效价。结果显示,该抗体具有很好的免疫反应性。本研究为进一步研发流感病毒疫苗及诊断试剂提供了重要的实验材料及有价值的数据。