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目的:通过建立体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）硫酸镍（NiSO4）毒性模型,观察NiSO4对MAPK通路蛋白及其磷酸化水平的影响,判断MAPK通路与细胞凋亡和炎症反应之间的关系,进一步探讨MAPK通路在NiSO4致HUVECs细胞炎症反应和细胞凋亡中的作用。方法:（1）选择对数生长期的HUVECs细胞,采用不同浓度的NiSO4（0、62.5、125、250、500、1000和2000μmol/L（μM））分别处理该细胞24和48 h;分别用P38丝裂原活化蛋白激酶（P38）、C-Jun N末端激酶（JNK）、细胞外信号相关激酶（ERK1/2）抑制剂（10μM SB203580、10μM SP600125、10μM U0126）预处理HUVECs细胞30 min,随后再联合1000μM NiSO4处理HUVECs细胞24h。（2）采用CCK-8试剂盒检测NiSO4对HUVECs细胞存活率的影响。（3）采用生化试剂盒检测细胞内活性氧（ROS）水平、丙二醛（MDA）、总谷胱甘肽（T-GSH）和氧化型谷胱甘肽（GSSG）的含量、超氧化物歧化酶（SOD）的活性;（4）采用DAPI染色观察NiSO4染毒后HUVECs细胞形态学变化,Annexin V-FITC/PI试剂盒测定HUVECs细胞的总体凋亡率。（5）实时荧光定量法（RT-q PCR）测定HUVECs细胞内凋亡因子（Bcl-2、Bcl-XL、Bax和Caspase 3）和炎性因子（TNF-α、IL-6和TGF-β）的mRNA水平。（6）蛋白免疫印迹法（Western blot）测定MAPK通路相关蛋白（P38、JNK、ERK1/2、NF-κB、C-Jun及AP-1）、凋亡相关蛋白和炎症因子蛋白的表达。结果:（1）细胞增殖和毒性实验结果显示:随着NiSO4染毒剂量（0、62.5、125、250、500、1000、2000μM）和染毒时间（24、48 h）的增加,125-2000μM NiSO4组HUVECs细胞存活率呈明显的剂量和时间依赖性降低趋势,且其暴露24和48 h的IC50分别为899μM、369.7μM（P＜0.05）。（2）根据细胞毒性实验结果,本研究选择62.5、250和1000μM NiSO4染毒HUVECs细胞24 h,观察NiSO4对HUVECs细胞氧化应激、细胞凋亡、炎症反应以及信号转导通路相关基因和蛋白水平的影响。（1）生化实验结果揭示:相较于对照组,62.5、250、1000μM NiSO4组荧光密度均显著升高（P＜0.05）,分别增加了6.72%、12.89%和32.04%;同样,MDA的含量在250和1000μM NiSO4组逐渐增加（P＜0.05）;GSSG/GSH的比率在62.5、250和1000μM NiSO4组均明显增加（P＜0.05）;而SOD的活性在250和1000μM组明显减少,且与对照组相比差异均具有统计学意义（P＜0.05）。（2）RT-q PCR结果显示:250、1000μM NiSO4组HUVECs细胞内IL-6、TNF-α、Bax和Caspase 3的mRNA表达水平随着NiSO4浓度的升高而升高,而TGF-β、Bcl-2和Bcl-XL的mRNA表达水平随着NiSO4浓度的升高而降低,且1000μM NiSO4组的上述基因异常表达最为显著（P＜0.05）;（3）Western blot结果显示:NF-κB、AP-1、IL-6、TNF-α、Bax和Cleaved Caspase 3的蛋白水平及P38、JNK、ERK1/2和C-Jun的磷酸化水平伴随着NiSO4染毒浓度的增加而明显上调,而TGF-β、Bcl-2和Bcl-XL的表达随之下调,P38、JNK、ERK1/2和C-Jun的总蛋白水平未呈现明显改变,上述蛋白结果的差异表达尤其在1000μM NiSO4组最为显著（P＜0.05）。（3）DAPI染色及流式结果显示:NiSO4染毒组HUVECs细胞核中荧光密度显著增加,并伴有膜起泡、核固缩及凋亡小体形成,且以1000μM NiSO4组最为明显。62.5、250、1000μM NiSO4组的HUVECs细胞总体凋亡率均较对照组而言明显升高（P＜0.05）。（4）根据上述实验结果,为了验证MAPK通路在NiSO4致内皮细胞损伤中的重要作用,本研究选用3种MAPK抑制剂进行了功能回复实验。细胞流式结果显示:1000μM NiSO4组细胞凋亡率较对照组而言明显上升（P＜0.05）;与NiSO4组相比,NiSO4+SB253080/SP600125组明显降低了凋亡细胞比率,而NiSO4+U0126组升高了凋亡细胞比率（P＜0.05）。Western blot结果显示:NiSO4诱导HUVECs细胞凋亡和炎症反应的发生与其介导的MAPK信号通路的激活有关。（1）与对照组相比,NiSO4染毒后细胞内NF-κB、p-C-Jun、AP-1、Bax、IL-6和TNF-α的蛋白水平均被上调,而TGF-β、Bcl-2和Bcl-XL表达被下调（P＜0.05）。（2）与NiSO4组相比,NiSO4+SB203580/SP600125/U0126组HUVECs细胞中p-C-Jun、NF-κB和AP-1蛋白水平被下调（P＜0.05）。（3）与NiSO4组相比,NiSO4+SB203580/SP600125/U0126组HUVECs细胞中IL-6和TNF-α的水平均被明显下调（P＜0.05）,而TGF-β的表达无明显改变（P＞0.05）。（4）与NiSO4组相比,NiSO4+SB203580/SP600125组HUVECs细胞中Bax的水平均被下调,而在NiSO4+U0126组被上调（P＜0.05）;与NiSO4组相比,NiSO4+SB203580/SP600125组HUVECs细胞中Bcl-2被上调（P＜0.05）,而NiSO4+U0126组HUVECs细胞中Bcl-2的表达水平无明显改变（P＞0.05）;与NiSO4组相比,NiSO4+SP600125组HUVECs细胞中Bcl-XL表达被上调（P＜0.05）,而NiSO4+SB203580/U0126组的Bcl-XL水平均无明显改变（P＞0.05）。结论:NiSO4可激活体外培养的HUVECs细胞内MAPK信号通路,并以应激活化的P38和JNK MAPK通路在NiSO4诱导的HUVECs细胞炎症反应和凋亡中发挥着重要调控作用。