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目的：高迁移率族蛋白B1（HMGB1）作为一种晚期炎症介质，介导了脓毒症和其他全身炎症的致死性效应，研究其病理生理作用与意义将有助于深化对脓毒症发病机制的认识，并为免疫反应的调控提供潜在的干预目标。本实验拟采用HMGB1体外刺激小鼠脾脏调节性树突状细胞（DCreg），重点围绕HMGB1对DCreg免疫功能的影响及其受体机制进行初步探讨，旨在为脓毒症及多器官功能障碍综合征的预防和治疗提供新思路。方法：1.分离培养正常Balb/c小鼠脾脏DCreg(CD11clowCD45RBhighDCs)，采用不同剂量的HMGB1（10、100、1000ng/ml）刺激12小时，并以100ng/ml HMGB1于不同时间点（2、12、24小时）刺激，观察HMGB1刺激与DCreg分泌白细胞介素（IL）-10和IL-12水平、表面共刺激分子CD40、CD80、CD86和主要组织相容性复合物（MHC）-II表达的剂量-效应关系及时间-效应关系。采用ELISA法检测上清中IL-10和IL-12水平，DCreg共刺激分子表达采用流式细胞仪分析。2. DCreg经100ng/ml的HMGB1刺激12小时后，与脾T淋巴细胞以1:100的细胞比例混合培养，于共同作用后3天观察T淋巴细胞增殖反应、功能性极化（Th1/Th2）、IL-2表达情况。3. HMGB1刺激后，分别采用流式细胞术和PCR技术检测DCreg表面Toll样受体（TLR）4的表达，进一步观察封闭TLR4受体对HMGB1刺激后DCreg分泌IL-10和IL-12水平、以及对T淋巴细胞增殖反应、功能性极化、IL-2表达的影响。结果：1. HMGB1对小鼠脾脏DCreg功能的影响：（1）HMGB1刺激后，DCreg分泌IL-10、IL-12水平于1224小时分别明显升高和下降（P<0.01），其中以作用12小时后达稳态；10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml的HMGB1刺激均可诱导DCregIL-10、IL-12分泌水平分别明显上升和下降（P<0.01），其中HMGB1的浓度为100ng/ml时，DCreg分泌IL-10、IL-12趋于稳定。（2）与正常对照组相比，100ng/ml的HMGB1刺激DCreg12小时后，表面共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC-II表达均明显下调（P<0.01）。2. HMGB1诱导的DCreg对小鼠脾T淋巴细胞功能的影响：HMGB1诱导的DCreg与T淋巴细胞以1:100的比例相互作用3天，与对照组比较，T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应明显减弱，上清液中干扰素（IFN）-γ/IL-4比值显著降低，IL-2水平明显降低（P<0.01）。3. HMGB1介导小鼠脾脏DCreg作用的受体机制：（1）100ng/ml HMGB1刺激12小时后，DCreg表面TLR4表达显著上调（P<0.01）；（2）拮抗TLR4后，HMGB1刺激的DCreg分泌IL-10、IL-12水平与对照组比较变化不明显，T淋巴细胞增殖反应、功能性极化、IL-2水平亦未见显著改变（P>0.05）。结论：1. HMGB1能促进IL-10的合成、释放增加，抑制IL-12的合成、释放，诱导DCreg表面共刺激分子表达减弱，HMGB1可能是诱导DCreg功能分化的重要免疫刺激信号。2. HMGB1诱导的DCreg使脾T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应明显抑制，并促进T淋巴细胞向Th2功能性极化，抑制IL-2的合成、释放。3. HMGB1能上调DCreg受体TLR4表达，TLR4可能是参与HMGB1诱导DCreg功能分化的主要受体之一。