介观流控微珠生物芯片检测系统研究及在基因分型方面的应用

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zxc694134272
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本研究课题构建了一种新型的介观流控微珠生物芯片体系。该体系是一种集成度高、检测速度快、灵敏度高、高通量、低污染以低成本、基于介观流控的检测系统。该平台构建方式为:首先以直径250μm二氧化硅微珠作为寡核苷酸探针的固定载体,3-氨丙基三甲氧基硅烷处理使其表面氨基硅烷化,使用PDITC偶联得到异硫氰酸化珠,异硫氰酸键可将末端氨基修饰的寡核苷酸探针桥连在功能化玻璃微珠表面。选取内径300μm毛细管,和PDMS凹槽型薄膜作为检测微通道。而后将标记有不同探针寡核苷酸的玻璃微珠按照一定顺序排列进微通道之中,两端用镍丝封堵,再将蠕动泵专用硅胶管连接在孔道两端,将硅胶管接入蠕动泵中,就完成了基础设备构建。荧光修饰的含有与探针互补序列的靶标DNA溶液在蠕动泵作用下流经微通道,即被相对应微珠所捕获。而后进行扫描,根据位置寻址对应微珠,即可得到分析结果。对此体系检测参数进行了优化,确定了探针固定时间剂浓度。该系统的检测下限可以达到1×10-11M,检测时间在30min以内,较传统玻璃基片的微阵列芯片有较大提高。利用此体系对人类基因病地中海贫血的常见突变位点进行了单碱基突变检测,和人类白细胞抗原HLA-DQA的基因分型。在这两个方面的应用都得到了较好结果。根据此体系提高整合度设计了新型介观流控微珠生物芯片分析仪,并应用到实际检测之中,大大提高了分析效率,具有广阔的应用前景。
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