【摘 要】
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已知HIV外壳糖蛋白可在感染细胞表面表达并具有诱导与CD4阳性的靶细胞融合作用(Dalgleish AG et al,1984;Klatzmann D et al,1984;Kowalski M et al,1987),于是在本论文中我
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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已知HIV外壳糖蛋白可在感染细胞表面表达并具有诱导与CD4阳性的靶细胞融合作用(Dalgleish AG et al,1984;Klatzmann D et al,1984;Kowalski M et al,1987),于是在本论文中我们构建了稳定表达Env基因的细胞系,并建立在显微镜下筛选HIV融合抑制剂的细胞模型.我们将在Hela细胞表面表达Env基因,首先将Env基因正向插入表达载体pcDNA3的多克隆位点BamH1处,然后用限制性内切酶将重组质粒线性化后通过Lipofectin转染进Hela细胞.Env在细胞表面的表达产物通过间接免疫荧光及细胞流式技术检测,并用Western Blot方法检测表达产物前体gp160向gp120/gp41的加工过程.通过与CD4阳性的T淋巴细胞-CEM共同培养,检测Helaenv细胞的融合性质,在显微镜下观察到形成一定数量的合胞体,形状特异,并且形成的合胞体可继续与周围CEM细胞发生融合.HIV融合抑制剂上市药T20可特异性阻断HIV外壳糖蛋白gp120/gp41介导的与CD4阳性细胞的融合作用(Kilby J M,et al,1998).通过此药对本论文建立的筛选抗HIV融合抑制剂的细胞模型进行评价.经过努力,我们初步建立了一个快速、方便、可重复使用的筛选抗HIV融合抑制剂的细胞模型.
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