Id-1在食管鳞状细胞癌中表达的生物学意义及其体外实验研究

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目的:研究Id-1在食管癌发生和发展中的表达及其与临床病理特征、预后的关系;观察HCPT对人食管癌细胞株Eca109迁移、趋化运动以及对Id-1表达的影响,进一步阐明Id-1基因表达与食管癌进展的关系,为Id-1成为食管癌临床预防和治疗的新靶点提供理论依据,也为最终阐明食管癌发生和发展的分子机制奠定基础。方法:采用逆转录聚合酶链反应RT-PCR以及蛋白印记Western blot方法对其中随机选取的30例食管癌组织及其对应的癌旁食管粘膜组织进行Id-1mRNA及其蛋白的相对定量检测,分析其表达与食管癌临床病理特征的关系;采用免疫组织化学方法检测80例食管鳞状细胞癌石蜡包埋组织中的Id-1的表达情况,并通过分析其表达与临床病理学特征的关系,进一步分析Id-1表达与预后的关系。常规培养的人食管鳞状细胞癌细胞株Eca109细胞经不同浓度的羟基喜树碱(HCPT)进行处理后,通过划痕试验以及Boyden小室试验检测其对细胞迁移和趋化运动能力的影响,并通过蛋白印记以及免疫细胞化学检测Id-1蛋白的表达变化。结果:1食管癌及癌旁组织中Id-1的表达以及与临床病理特征的关系RT-PCR结果显示Id-1mRNA在食管癌及癌旁食管粘膜组织中表达的相对光密度值(IDV)分别1.197±0.025、0.863±0.034,前者明显高于后者,差异具有统计学意义(P<0.05),Id-1mRNA与食管鳞状细胞癌的分化程度呈负相关(P<0.05,r=-0.559),而与淋巴结转移、临床分期以及浸润深度、性别、年龄无显著差异(P>0.05);Western blot结果显示Id-1蛋白在食管癌及癌旁食管粘膜组织组织中表达的相对光密度值(IDV)分别0.828±0.019、0.679±0.027,前者明显高于后者,差异具有统计学意义(P<0.05),并且与鳞状细胞癌的病理学分级呈负相关(P<0.05,r=-0.591),淋巴结有转移组相对表达量高于无转移组,差异具有统计学意义(P<0.05),而与肿瘤浸润深度、临床分期、性别、年龄等临床病理特征无关(P>0.05);免疫组织化学检测结果显示Id-1蛋白在癌组织中高表达,在食管粘膜组织中低表达或者不表达,(χ2=12.325,P<0.05),Id-1蛋白与食管鳞状细胞癌病理学分级呈负相关(r=-0.285,P<0.05);有淋巴结转移组表达明显高于无淋巴结转移组(P<0.05),而与食管癌的浸润深度、临床分期、年龄、性别等临床病理学特征无关(P>0.05)。生存分析Kaplan-Meier单因素分析结果显示Id-1表达量的高低是影响食管癌预后的相关因素(P<0.01);Cox模型多因素分析结果显示Id-1蛋白表达情况对食管鳞癌预后有显著影响(P<0.05),高表达组死亡危险度为低表达组的2.314倍,Id-1可作为判断预后的指标。2 HCPT对体外培养的食管癌细胞株Eca109的影响以及与Id-1蛋白表达的联系细胞划痕实验表明随着HCPT浓度的增加,对Eca109细胞迁移运动的抑制作用增强;Boyden小室实验结果显示HCPT作用组细胞的趋化运动能力降低,随着浓度的增加穿膜细胞数明显减少;细胞免疫化学以及蛋白印记结果显示随着HCPT浓度的增加,Eca109细胞中Id-1蛋白表达量逐渐降低。结论:1 Id-1mRNA以及蛋白在食管癌组织中高表达,而在癌旁食管粘膜组织中低表达或者不表达,提示Id-1与食管鳞状细胞癌的发生密切相关。2 Id-1蛋白的表达与食管鳞状细胞癌的病理学分级以及淋巴结转移相关,提示Id-1可能参与了肿瘤的浸润和转移从而加速了肿瘤的进展。3 Id-1蛋白表达对生存率有影响,高表达预示低生存率,提示Id-1对指导临床治疗及判断预后有帮助。4 HCPT对体外培养的食管鳞状细胞癌Eca109细胞株的迁移及趋化运动能力具有明显的抑制作用,并且呈剂量依赖关系。5随着HCPT浓度的增加,食管癌细胞中Id-1蛋白表达量降低,表明HCPT治疗食管癌的机制可能与下调Id-1蛋白的表达有关。
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