影响制备转基因荧光鼠脑切片物化因素的初步研究

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转基因荧光鼠,因其卓越的分子标记特性,倍受生物学家的青睐。制备完整的转基因荧光鼠脑样本,有利于对完整鼠脑内的神经网络结构进行研究。传统的鼠脑样本制备方法,因其制备过程中存在多种影响荧光稳定性的因素,无法满足制备完整鼠脑的需求。研究样本制备中对荧光稳定性有重要影响的因素,有利于改进样本制备方法,实现制备完整转基因鼠脑样本的目标。   本文以GAD67-GFP和GFAP-GFP两种转基因小鼠为研究对象,经过一定的手术流程,获取脑片。再对脑片引入待研究的物化因素,通过荧光显微镜观察脑片荧光变化,并对所得图像分析处理。这些物化因素包括时间、温度、蓝光辐射、pH值、脱水试剂。   通过对实验结果的分析处理,初步证明如下结论:   (1)脑片中荧光蛋白在低温条件下很稳定,提高温度至37℃及以上易使荧光衰减。   (2)脱水剂的脱水能力越强,在相同时间内对荧光的衰减越大;脱水剂的浓度越高,在相同时间内对荧光的衰减越大;被脱水组织体积越大,荧光耐受高浓度脱水剂的时间越长;相同脱水剂和脱水时间处理下,脑组织不同区域的荧光稳定性未见较大差异。   (3)蓝光辐射对荧光的衰减与辐射时间和辐射强度有关,且荧光不可恢复。辐射强度越高,荧光衰减程度越大;辐射时间越长,荧光衰减越严重;GAD67-GFP和GFAP-GFP小鼠鼠脑荧光对辐射的敏感性差异不大。   (4)荧光在pH值为6~8范围内相对稳定,当pH值不在此范围内时,荧光出现衰减。
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