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肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)易于侵犯门静脉形成癌栓(portal vein tumor thrombus,PVTT)导致肿瘤细胞的播散和转移。按照病程的不同,PVTT分为镜下癌栓(microscopic portal vein tumor thrombus,Mi-PVTT)和肉眼癌栓(macroscopic portal vein tumor thrombus,Ma-PVTT)两个阶段。目前对Mi-PVTT的研究报道不多,生物学特性还未知,能否作为HCC转移的标志尚不明确,至今仍然难有一种手段能够早期发现或预测PVTT的形成。PVTT的形成是多因素、多步骤的生物学现象,单因素和局限在基因水平的研究难以全面揭示PVTT形成的分子机制,对PVTT的研究必须建立在高通量的基因组学和蛋白质组学基础上。 表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术由于其能为不同的生物样品快速地建立蛋白质或肽谱,该技术已被广泛地应用于肿瘤学研究。本研究从肿瘤组织和血清蛋白质组学角度,分别筛选PVTT形成生物标记物,探讨肿瘤组织的蛋白质组学和血清蛋白质组学的关系,为PVTT形成的分子机制研究提供基础;同时比较不同临床病理特征对血清蛋白组的影响,特别是不同阶段PVTT的血清蛋白组比较,并建立PVTT的血清蛋白质组诊断预测模型。 第一部分 蛋白质芯片SELDI-TOF-MS技术平台的建立 本研究目的是建立稳定的蛋白质芯片SELDI-TOF-MS技术平台,优化实验的技术条件。选择肝细胞癌患者血清和肝细胞癌组织中分离的肿瘤细胞全蛋白裂解液各8例,采用WCX2、H4、SAX2、IMAC3四种蛋白质芯片,经表面加强激光解吸电离-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)测定蛋白质谱,筛选血清和组织细胞裂解液的最佳蛋白质芯片,摸索芯片最佳技术参数,评估该技术的稳定性和可靠性。 结果: 1.蛋白质芯片显示蛋白质峰质荷比(m/z)主要在1100～30000范围内。 2.血清蛋白质图谱显示峰最多的为WCX2芯片,IMAC3其次,而H4和SAX2较少。 3.细胞蛋白质图谱显示峰最多的为WCX2芯片,H4其次,而IMAC3和SAX2