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目的:建立适合潜艇舱室的微生物气溶胶富集技术,跟踪监测潜艇在开放状态及封闭状态下作业舱室内微生物气溶胶浓度、菌谱组成及粒径分布变化,评估其空气污染程度及潜在的生物风险。方法:比较不同微生物气溶胶采样器(LWC-1和安德森)的富集效率,采用固体撞击式采样进行微生物气溶胶的富集;采用MALDI-TOF质谱技术对潜艇舱室空气中可培养微生物进行鉴定;应用实时荧光PCR方法对潜艇舱室空气中非可培养微生物进行检测;评价标准依据《室内空气质量标准》(GB/T 1883-2002)。结果:与LWC-1型和安德森采样器空气微生物采样器相比,安德森采样器更适于作为本研究的微生物气溶胶采集器,安德森采样器的6级不同直径范围的孔道可以把空气中的微生物粒子按照人体呼吸道结构进行分级,同时可以将粒径作为重要参数之一与微生物气溶胶浓度一起评价空气微生物污染程度,同时可进行非可培养微生物气溶胶的富集鉴定;舱室内的微生物气溶胶,航行后浓度比航行前明显升高(P<0.05),不同舱室以及不同级平皿上的菌落数均增加;长期封闭作业时,航行前可培养微生物为21个属56个种,革兰氏阳性球菌和革兰氏阳性芽孢杆菌占总菌数为55.11%,革兰氏阴性杆菌占总菌比例为4.23%,并且均为非发酵糖革兰阴性杆菌,航行后为37个属80个种,革兰阴性杆菌占总菌比例为29.75%,肠杆菌科占革兰阴性菌的比例为24.4%,航行后革兰阴性杆菌增加明显,革兰阳性球菌和革兰阳性芽孢杆菌占总菌数25%,真菌类占总菌比例为24.75%,生物多样性增加显著,丝状真菌和革兰阴性杆菌明显增加;航行前后优势细菌种群发生明显改变;FQ-PCR未检到甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、腺病毒、嗜肺军团菌、肺炎衣原体、肺炎支原体。结论:选择的安德森采样器适于潜艇狭小空间的微生物气溶胶富集及构成分析,可以同时使用微生物气溶胶的粒径和浓度一同评价空气微生物污染程度;航行前后潜艇舱室微生物气溶胶的浓度及构成复杂性明显增加,不同舱室以及不同级平板的菌落数均增加,以条件致病菌增加为主要特征;所分离鉴定的菌种都可以在安德森6级采样器的各级采样培养平皿上培养获得,没有选择性和特异性,说明细菌在空气中存在的状态决定于其所附着的尘埃颗粒大小;长航前后微生物气溶胶的浓度未超出国家关于室内空气质量的标准要求,未检出呼吸道病毒、嗜肺军团菌、肺炎衣原体和肺炎支原体,但是从微生物粒径构成及菌谱组成变化考虑,对作业人员的卫生健康仍存在潜在风险,应采取合理有效的空气净化消毒措施,从而保证作业人员的健康及工作效率。