目的：视黄醇结合蛋白4 (Retinol bingding protein 4, RBP4)是一种新的脂肪因子,主要由肝脏和脂肪组织分泌,在循环中负责运送视黄醇(维生素A)至靶组织,越来越多的研究表明RBP4参与了胰岛素抵抗(Insulin resistence, IR)、2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus, T2DM)及其血管并发症的发生。维生素D是一种与骨骼健康相关的脂溶性维生素,主要从食物及其日晒中获得,它通过与细胞核内的维生素D受体(Vitamin D receptor, VDR)结合而发挥生物效应,调控细胞的增殖分化与凋亡,参与多种疾病的发生,其经典作用为调节钙磷代谢,近年来的研究表明维生素D与糖尿病、心血管疾病密切相关。临床上将25-羟维生素D(25-Hydroxyvitamin D,25(OH)D)水平作为反映维生素D营养状态的功能指标。下肢血管病变(Lower extremity arterial disease, LEAD)是指在糖尿病基础上发生的下肢血管动脉粥样硬化,最终造成下肢动脉的闭塞与狭窄,是常见的外周动脉疾病,属于糖尿病大血管并发症之一,严重影响患者的生活质量。本研究旨在通过检测T2DM合并LEAD患者血清RBP4和25(OH)D水平,以观察RBP4、25(OH)D与糖尿病下肢血管病变的关系,并探讨口服维生素D对血清RBP4水平的影响及对糖尿病下肢血管病变的干预作用。方法：选择2012年10月-2013年1月在安徽省立医院内分泌科住院的T2DM患者,共107例(男63例,女44例),符合1999年WHO关于糖尿病的诊断标准,根据四肢多普勒结果来分组,踝肱指数(Ankle brachia index, ABI)< 0.9提示存在下肢血管病变。①单纯T2DM组(DM1组)：45例②T2DM合并LEAD组(DM2组)：62例,DM2组随机分为基础治疗组(DM3组,n=31例)和基础治疗加维生素D治疗组(DM4组,n=31例),观察12周③对照组(NC组)：同期健康体检人员38例记录所有受试者年龄、性别、吸烟史、糖尿病病程,测量身高、体重、臀围、腰围,计算腰臀比(Waist-hip ratio, WHR)(WHR=腰围(cm)/臀围(cm))和体重指数(Body mass index, BMI)(BMI=体重(kg)/身高(m)2))；水银血压计测量各组收缩压(Systolic blood pressure, SBP)和舒张压(Diastolic blood pressure, DBP);自动生化仪测定空腹血糖(Fasting plasma glucose, FPG)、总胆固醇(Total cholesterol, TC)、甘油三酯(Triglyceride, TG)、高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol, HDL-c)和低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol, LDL-c);高压液相层析技术检测糖化血红蛋白(HbAlC);酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent assay, ELISA)测RBP4水平；放射免疫法(Radioimmunoassay, RIA)测定空腹胰岛素(Fasting insulin, FINS)水平,计算稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(Homeostasis model assessment of insulin resistance, HOMA-IR) (HOMA-IR=FINS (mu/L) ×FPG (mmol/L)/22.5); ELISA法测定血清25(OH)D水平,25(OH)D≥30ng/ml作为维生素D水平充足的标准,20ng/ml≤ 25(OH)D<30ng/ml为维生素D水平不足,25(OH)D<20ng/ml为维生素D水平缺乏。对DM2组患者进行临床症状评分。应用Pearson和Spearman相关性分析讨论血清RBP4、25(OH)D与各指标的相关性,应用多因素Logistic回归分析筛选T2DM发生LEAD的预测因子。12周后随访DM3及DM4组患者,复查相关临床指标及四肢多普勒,重新进行临床症状评分,评估治疗效果。结果：1.三组性别比无明显差异(P>0.05)；与NC相比,DM1组及DM2组患者的FPG、FINS、HbAlC、TC、TG、LDL-c、HOMA-IR、SBP、BMI、WHR、RBP4增高,25(OH)D、HDL-c水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)；DM2组患者的血清25(OH)D、HDL-c、ABI低于DM1组,病程、年龄、RBP4、FPG、 LDL-c、SBP、DBP、HbAlC、吸烟率高于DM1组(P<0.05)；DM1及DM2组患者血清25(OH)D水平充足的人数百分比低于NC组(P<0.05)；与DM3组相比,DM4组患者经12周的维生素D补充,血清RBP4、HOMA-IR、TG、LDL-c、FINS及临床症状评分降低,血清25(OH)D水平及平均ABI值升高(P<0.05),DM3组治疗总有效率为67.74%,DM4组为93.55%,差异有统计学意义(P<0.05)。2.相关分析结果提示,RBP4与TG(r=0.112, P<0.05)、LDL-c (r=0.39, P<0.05)、 HOMA-IR (r=0.436,P<0.05)、BMI (r=0.269, P<0.05)、WHR (r=0.551, P<0.05)呈正相关,与HDL-c (r=-0.278, P<0.05),25(OH)D (r=-0.538, P<0.05)呈负相关；25(OH)D与病程(r=-0.663, P<0.05),HbAlc(r=-0.482 P<0.05)、RBP4 (r=-0.538, P<0.05), FPG (r=-0.229, P<0.05), HOMA-IR (r=-0.26, P<0.05)呈负相关。3.以是否有下肢血管病变为因变量,以年龄、病程、性别、是否吸烟、TC、TG, HDL-c、LDL-c、BMI、RBP4、25(OH)D、HOMA-IR、SBP、DBP、FINS、FPG、 WHR为自变量,进行多因素Logistic回归分析,结果示吸烟(OR=5.565, 95%CI=1.379-22.458)、FPG (OR=1.818,95%CI=1.027-3.217)、SBP (OR=1.167, 95%CI=1.081-1.260)、LDL-c (OR=2.746,95%CI=1.122-6.721)是下肢血管病变的危险因素,HDL-c (OR=0.014,95%CI=0.000-0.432)、25(OH)D(OR=0.892, 95%CI=0.813-0.978)是下肢血管病变的保护因素。结论：1.血清RBP4浓度升高及25(OH)D水平降低与2型糖尿病合并下肢血管病变的发生有关。2.口服维生素D可以降低血清RBP4水平,维生素D可能通过改善胰岛素抵抗、抑制炎症反应及脂代谢紊乱等,进而对糖尿病下肢血管病变发生起到一定的预防作用。目的：近年的研究表明胰岛素抵抗(Insulin resistance, IR)及慢性、亚临床性的炎症是动脉粥样硬化(Atherosclorosis, AS)和糖尿病共同的病理基础,脂肪因子及炎症相关因子与糖尿病大血管病变的发生、发展关系密切。视黄醇结合蛋白4(Retinol binding protein 4, RBP4)是一种新的脂肪因子,参与了IR和2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus, T2DM)的发生。核因子-κB (Nuclear factor-kappa B, NF-κB)是近年来倍受关注的一种转录因子,调控多种基因的表达,参与了AS的炎性反应机制。维生素D是一种脂溶性类固醇衍生物,主要包括维生素D2及维生素D3,除其传统的调节钙磷代谢外,还参与机体免疫及炎性反应,影响胰岛素的合成和分泌,调节糖脂代谢。本实验采用高糖高脂饲料加链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)诱导出糖尿病大鼠和糖尿病动脉粥样硬化大鼠模型,观察模型大鼠血清、附睾脂肪组织RBP4水平以及主动脉NF-jB的活性,探讨RBP4、 NF-κB与糖尿病动脉粥样硬化的关系以及RBP4参与糖尿病大血管病变的可能机制,并观察补充维生素D对RBP4、NF-κB的影响。方法：SPF级雄性Wistar大鼠75只随机分为四组：①NC组(正常对照组)：NC组②单纯糖尿病组：DM1组③糖尿合并动脉粥样硬化组：DM2组④维生素D干预组：DM3组16周后处死大鼠,取部分主动脉段进行苏木素伊红(Hematoxylin and eosin staining, HE)染色；取内脏脂肪组织称重并计算脂体比；取血清用自动生化仪测定空腹血糖(Fasting plasma glucose, FPG)、甘油三酯(Triglyceride, TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-c)和高密度脂蛋白胆固醇(HighDendity lipoprotein cholesterol, HDL-c);放射免疫分析法(Radioimmunoassay, RIA)测空腹胰岛素(Fasting insulin, FINS);酶联免疫法吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)测主动脉NF-κB活性和血清RBP4水平；逆转录聚合酶连法(Reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)测附睾脂肪组织RBP4水平；尾动脉血压仪测尾动脉收缩压(Systolic blood pressure, SBP);计算血浆致动脉粥样硬化指数(Atherogenic index of plasma, AIP),稳态模式评估法测定胰岛素抵抗指数(Homeostasis model assessment of insulin resistance, HOMA-IR)。结果：(1) DM1、DM2组大鼠血清、脂肪组织RBP4水平及主动脉NF-κB活性明显高于NC组,DM2组上述指标均高于DM1组(P<0.05),经维生素D干预后,DM3组大鼠的上述指标较DM2组明显下降。(2) DM1、DM2组大鼠16周后体重明显增加,TG、LDL-c、FPG、FINS、脂体比、SBP、HOMA-IR及AIP均较NC及DM3组明显升高,而HDL-c明显降低；DM2组TG、LDL-c、FPG、FINS、脂体比、SBP、HOMA-IR及AIP高于DM1组。(3)HE染色示：NC及DM3组大鼠主动脉壁各层结构正常,DM1组大鼠主动脉内膜增厚,内膜下少量泡沫细胞聚集,血管内皮细胞排列不规则,中膜平滑肌结构紊乱。DM2组主动脉内膜明显增厚,内膜下可见泡沫细胞积聚和斑块浸润,中膜平滑肌细胞增生、排列紊乱,弹性纤维断裂、崩解,可见钙盐沉积。(4) Pearson相关分析显示,血清RBP4与TG (r=0.329, P<0.01), LDL-c (r=0.399, P<0.05)、FPG(r=0.406, P<0.05)、FINS(r=0.562, P<0.05)、脂体比(r=0.550,P<0.01)、AIP (r=0.432, P<0.01)、HOMA-IR (r=0.663, P<0.01)、NF-κB (r=0.481, P<0.01)、 SBP (r=0.449,P<0.01)呈正相关,与HDL-c (r=-0.363,P<0.01)呈负相关；附睾脂肪组织RBP4与TG(r=0.498, P<0.01)、LDL-c (r=0.362, P<0.01)、FINS(r=0.326, P<0.01)、脂体比(r=0.470,P<0.01)、体重(r=0.317, P<0.01)、AIP(r=0.429, P<0.01)、 HOMA-IR (r=0.371,P<0.01)、NF-κB (r=0.371, P<0.01)、SBP (r=0.561, P<0.01)呈正相关,与HDL-c (r=-0.421,P<0.01)呈负相关；血清RBP4与附睾脂肪组织RBP4呈正相关(r=0.633,P<0.01)。在模型组大鼠中以是否有大血管病变作为因变量,其余观察指标作为自变量,进行多因素logistic回归分析,结果示RBP4(OR= 1.409,95%CI=1.188-2.305)、TG (OR=1.179,95%CI=1.093-1.475)是糖尿病大血管病变发生的独立危险因素。结论：(1)单纯糖尿病组大鼠的血清、附睾脂肪组织RBP4水平及主动脉NF-κB活性较对照组大鼠增高,而糖尿病合并动脉粥样硬化组上述指标进一步升高。(2) RBP4、NF-κB水平增高与糖尿病动脉粥样硬化的发生有关；RBP4可能通过胰岛素抵抗、炎性反应及糖脂代谢紊乱等机制,参与了糖尿病动脉粥样的发生,是糖尿病动脉粥样硬化发生的独立危险因素。(3)补充维生素D可以降低血清、脂肪组织RBP4水平及主动脉NF-κB活性,通过改善胰岛素抵抗,提高机体对胰岛素的敏感性,减轻动脉粥样硬化的炎性反应,实现对糖尿病大血管病变的保护作用。