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海洋天然活性物质的研究是当今新药研究领域的一个热点。本实验对泥螺中的生物活性成分进行了分离纯化和结构鉴定;并从幼鲨肝脏中分离纯化了肝脏刺激物,研究了其对急性肝损伤、线粒体呼吸功能和抗氧化能力的影响。
利用抗菌模型和肿瘤细胞毒模型,对浙江舟山群岛12种海洋动物中的生物活性物质进行了筛选。结果表明,7种动物的乙醇提取物有明显的抗金黄色葡萄球菌作用,其中,泥螺乙醇提取物的活性最强;大竹蛏和泥螺的乙醇提取物以及纵条肌海葵的水提物对SMMU-7721细胞有明显的细胞毒活性,IC50分别为89μg/ml、71ug/ml和63.2ug/ml。
利用SMMU-7721肿瘤细胞毒模型进行活性跟踪,通过快速减压柱层析(flashchromatography)、低压柱层析(LPLC)、凝胶柱层析、高效液相层析(HPLC)制备,从泥螺中分到了5种化合物,对其质谱和核磁共振谱进行解析,确定了其结构。
幼鲨肝脏经70℃加热、乙醇沉淀、离子交换层析、SephacrylS-100HR凝胶过滤、HPLC得到了电泳纯的鲨鱼肝刺激物(sHSS),比活达到2941U/mgprotein,纯化倍数达到56.8。
以肝癌细胞HepG2为指示细胞,利用[3H]-TdR掺入法研究sHSS的促肝细胞增殖活性,发现其能明显促进HepG2细胞的增殖,sHSS浓度160μg/ml时,其对HepG2细胞的刺激指数达到5.33。
建立了小鼠和大鼠的急性肝损伤模型,sHSS能显著抑制CCl4、D-氨基半乳糖、硫代乙酰胺引起的小鼠和硫代乙酰胺(TAA)引起的大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平的升高,提高硫代乙酰胺引起的急性肝损伤大鼠的存活率。组织病理学检查结果表明:注射sHSS的大鼠肝组织和肝细胞受损的程度明显降低。
预先注射sHSS能抑制TAA引起的大鼠肝脏线粒体以苹果酸盐-谷氨酸盐和琥珀酸盐为底物ADP诱导的氧消耗、呼吸控制率(RCR)、ADP/0、氧化磷酸化率的降低和线粒体膜上NADH-细胞色素C还原酶、琥珀酸盐-细胞色素C还原酶、细胞色素C氧化酶和ATPase活性的降低,说明sHSS能改善因TAA而受损的线粒体呼吸功能。线粒体肿胀和跨膜电位则不受TAA和sHSS的影响。
sHSS能抑制TAA引起的线粒体中谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶水平的降低,降低线粒体和肝脏中丙二醛的含量,提高线粒体和肝脏的抗氧化能力。