紫外线（Ultraviolet,UV）是造成皮肤损伤、皮肤屏障功能破坏的主要因素。根据流行病学研究表明,约80%的暴露皮肤病的病因均为紫外线引起的皮肤光损伤所致,因此研究能够抵御紫外线作用的有效物质具有一定的科学价值和应用前景。枸杞子是我国西部干旱高紫外线地区重要植物资源之一,有着滋阴补血、益气明目等功效,常常用在眼睛护理、预防色素沉淀和抵御紫外线等方面。枸杞中含有较多的活性物,其中包括枸杞多糖、类胡萝卜素、枸杞黄酮和枸杞多酚等。枸杞多糖具有免疫调节、抗氧化和抗辐射等作用;枸杞黄酮、枸杞多酚具有清除自由基、明显的抗氧化等作用。综上,鉴于枸杞中含有较多活性物对光损伤存在一定作用,因此本文在枸杞提取物具有抗氧化和免疫调节的基础上,提出了通过调控皮肤屏障功能蛋白来修复皮肤屏障,维持良好皮肤屏障功能的同时,并增强皮肤内在抗氧化能力和维持皮肤结构功能的完整性。本文具体研究内容安排如下:首先通过分光光度法测定了枸杞总黄酮、总多酚含量,其测试结果枸杞提取物中总黄酮含量、总多酚的含量分别为4.65±0.02μg/mg、86.03±3.06 ug/mg;采用体外DPPH自由基清除抗氧化实验对枸杞提取物的抗氧化效果进行评价,枸杞提取物清除DPPH自由基清除率IC₅₀为0.1484 mg/m L,表现出良好的抗氧化活性;为测试枸杞提取物对角质形成细胞（Hacat）与成纤维细胞（NIH-3T3）对UVB诱导细胞损伤的预保护效果,在UVB损伤细胞前,分别给予50μg/m L和100μg/m L枸杞提取物,采用MTT法测定Hacat、NIH-3T3细胞的存活率,在50μg/m L枸杞提取物干预下,Hacat和NIH-3T3细胞的存活率分别为59.11±1.69%和59.57±1.26%;在100μg/m L枸杞提取物干预下,Hacat和NIH-3T3细胞的存活率分别为67.47±2.44%和72.29±5.27%,结果表明枸杞提取物对Hacat和NIH-3T3细胞的UVB损伤具有保护作用。然后建立UVA联合UVB模拟日光紫外线辐射小鼠皮肤光损伤模型,探讨枸杞提取物对紫外线诱导皮肤光损伤的保护作用。将枸杞提取物均匀涂抹于KM小鼠背部皮肤,2 h后使用UVA联合UVB照射小鼠背部皮肤,依此持续9周。实验过程中测试经皮失水TEWL和对皮肤光损伤皱纹情况进行评分,评分结果表明了枸杞提取物可显著抑制皮肤损伤、恢复皮肤结构完整性和抑制TEWL来保持皮肤水合完整性;组织病理层采用H&E染色方法来分析表皮层厚度、Masson染色方法来分析真皮层胶原纤维,结果显示其可抑制表皮厚度增厚,促进胶原密度上升并恢复弹性纤维结构,当枸杞提取物浓度为50 mg/m L时,对UV损伤保护的效果尤其明显。最后从氧化应激机制及皮肤屏障功能相关蛋白水平表达探讨其保护皮肤损伤的可能存在的作用机理。采用免疫组织化学方法对MMP-3、MMP-9蛋白表达水平进行测定,证实了枸杞提取物可以有效地抑制MMP-3、MMP-9含量表达;采用酶联免疫分析法对皮肤组织中活性氧（ROS）活力进行测定、比色法对脂质过氧化物丙二醛（MDA）含量进行测定、比色法对皮肤组织超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力进行测定,验证了枸杞提取物显著提高UV诱导小鼠皮肤组织抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活力,同时降低MDA的含量及清除ROS含量;分别采用实时荧光聚合酶链式反应法（real-time quantitative PCR,RT-q PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测Nrf2m RNA基因转录及其蛋白表达,同时用RT-q PCR方法验证血红素加氧酶（HO-1）m RNA转录水平,结果发现枸杞提取物能够激活Nrf2的表达及调控下游靶基因HO-1的转录;采用酶联免疫组织化学（ELISA）方法对皮肤屏障分化蛋白丝聚合蛋白（filaggrin,FLG）、兜甲蛋白（Loricrin,LOR）进行含量测定、免疫组织化学方法（Immunohistochemistry,IHC）对FLG及内披蛋白（involucrin,INV）蛋白的表达进行考察、RT-q PCR法及WB法对水通道蛋白3（aquaporins-3,AQP3）m RNA基因转录及其蛋白的表达水平进行测试,结果发现枸杞提取物能够增强FLG、INV、LOR蛋白表达水平,来维持皮肤屏障功能完整性,并通过上调AQP3 m RNA转录水平和AQP3蛋白表达来维持表皮水合完整性。