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目的糖尿病引发的伤口难愈合仍是一个具有挑战性的临床问题。造成这种原因的两个关键因素是血管生成受损和细菌诱导的一系列炎症。丁香酚(EG)作为一种天然抗氧化剂,可能下调了血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1),并抑制了内皮细胞中核转录因子κB(NF-κB)的活化。然而,丁香酚具有刺激性气味和一定的挥发性,因此阻碍了其作为潜在治疗剂的临床应用。本研究制备了一种新型生物活性羧甲基纤维素钠(CMC)水凝胶,其负载丁香酚与β-环糊精(β-CD)的包合物(丁香酚β-环糊精/羧甲基纤维素钠水凝胶,EG-β-CD/CMC hydrogel)可调节血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1诱导核转录因子κB的活化。增强血管生成并抑制炎症,以加速体内糖尿病伤口的愈合。通过细菌实验发现丁香酚环糊精羧甲基纤维素钠水凝胶在体内和体外均表现出显著的抗菌活性。此外,该水凝胶还通过减少血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1与核转录因子κB诱导的内皮细胞功能障碍并促进血管生成来加速糖尿病伤口的愈合。方法以β-环糊精、丁香酚为原料,采用饱和水溶液法制备丁香酚环糊精包合物(EG-β-CD),以羧甲基纤维素钠、丁香酚环糊精包合物为原料,制备丁香酚环糊精包合物水凝胶,并根据丁香酚环糊精包合物释放情况进行处方优化。采用扫描电镜,红外光谱扫描,紫外-可见分光光度法,对其表面形貌、结构性能进行表征,通过细菌实验,探究该敷料的抗菌效果及机制。在细胞学实验中,通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)考察丁香酚环糊精包合物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响;Transwell实验探究丁香酚环糊精包合物对人脐静脉内皮细胞迁移能力的影响;通过血管生成实验,探究丁香酚环糊精包合物对血管生成的影响;最后通过Western Blot实验检测包合物对细胞内蛋白表达水平的影响,包括血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1,核因子κB,肿瘤坏死因子-α(TNF-α),炎症因子白介素-6(IL-6),血管内皮生长因子(VEGF),金属基质蛋白酶9(MMP-9)等。在药效学实验中,采用小鼠皮肤伤口模型,观察不同给药组的伤口愈合情况,并对伤口组织进行H&E染色,对伤口愈合质量进行评价。结果本文建立了紫外分光光度法对丁香酚环糊精包合物含量进行了分析,线性、精密度、回收率等均符合方法学要求。根据丁香酚环糊精包合物从水凝胶中的释放情况对处方进行优化,最终获得的丁香酚环糊精包合物水凝胶表面孔隙率高,成膜状,包合物均匀分散于水凝胶中,最优处方制备的包合物水凝胶10小时累积释放率达80%。通过SEM进行水凝胶微结构的研究。结果表明,CMC水凝胶和EG-β-CD/CMC水凝胶均显示出类似的三维网络,并具有大量规则的孔结构,表明将EG-β-CD装入许多较小的孔中使伤口周围快速吸水。在抑菌实验中,EG-β-CD浓度越高杀菌效果越好,细菌涂板实验直观显示随着EG-β-CD浓度的增加,细菌减少,在EG的介导下,EG-β-CD显示出对革兰氏阴性菌(大肠杆菌)和革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌)具有较强的抗菌活性。细胞实验中,通过MTT法测定EG-β-CD在一定范围内对HUVECs没有细胞毒性,EG-β-CD能促进HUVECs迁移以及血管生成,EG-β-CD处理组的细胞迁移数量明显高于游离的EG处理组。血管生成实验同样表明用EG-β-CD处理的细胞的环数明显高于单独使用游离EG的环数。接着我们通过Western Blot考察了EG-β-CD对细胞蛋白表达水平的影响,结果显示,与作为对照组的PBS组相比,EG和EG-β-CD显着下调了LOX-1,NF-κB,TNF-α和IL-6的表达,起到抗炎作用。EG和EG-β-CD增强了p-AKT,p-ERK和VEGF的表达,这表明EG在高糖(HG)诱导HUVECs中也激活了PI3K/AKT和ERK信号传导。这也表明,PBS处理组的MMP-9的蛋白水平最高,表明高糖诱导HUVECs中MMP-9的过表达,并可能导致细胞外基质过度降解,从而延迟伤口愈合。我们将水凝胶覆盖在糖尿病小鼠伤口的表面,并根据伤口恢复的时间通过拍照进行观察愈合程度,接下来又通过H&E染色观察糖尿病伤口的炎症和血管生成的变化。与PBS组相比,EG-β-CD/CMC水凝胶提高了伤口愈合的质量和速度。结论研究证实了EG通过发挥抗菌,消炎和血管生成作用,在促进糖尿病伤口愈合中发挥积极作用。EG-β-CD/CMC水凝胶的抗炎作用是由于EG抑制LOX-1的表达,它可能阻止NF-κB的激活和促炎性细胞因子的分泌。这些结果表明,制备的EG-β-CD/CMC水凝胶有助于糖尿病皮肤伤口的快速愈合,可能使其成为治疗糖尿病伤口的有前途的治疗策略。