论文部分内容阅读
目的：Schmid型干骺端软骨发育异常(Schmid type metaphyseal chondrodysplasia, SMCD)是常染色体遗传的骨骺发育异常,患者临床表现为摇摆步态,髋内翻、膝内翻及膝外翻,短肢畸形等。本研究通过对一个三代常染色体显性遗传Schmid型干骺端软骨发育异常家系进行基因测序,以明确患者及该家系的致病基因,这对丰富SMCD致病基因库及中国人患病的基因突变情况具有重要意义,也将为遗传咨询、产前诊断及新生儿筛查提供新的依据。方法：1.收集一个患病家系中10例成员静脉血及临床资料,其中先证者13岁,家系中成员根据遗传表型诊断该疾病患者7例,另外抽取的50例正常对照组的静脉血及临床资料,用天根血液基因提取试剂盒提取基因组DNA。2.根据家系患病情况绘制家系图谱。3.根据已报道的该病致病基因(COL10A1基因),用primer3设计引物。引物由上海博尚生物技术有限公司合成。PCR扩增目的基因,Tgradient PCR仪进行PCR反应。1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。Fluorchem9900图像分析系统进行拍照分析。将PCR产物交由博尚公司纯化、切胶回收及测序。Chromas图谱分析,将结果与Pubmed基因序列比对。4.单克隆测序：PCR产物片段pMD18-T载体的构建,目的片段连入PMD18-T载体,将各组分混匀离心后于4℃过夜连接后转化大肠杆菌DH5a感受态细胞。挑选单克隆菌落,加LB+AMP摇菌。提取质粒,PCR电泳验证阳性克隆。阳性克隆测序。结果：1. Chromas图谱分析：该家系7位患者均在COL10A1基因三号外显子第2100位点处缺失1个碱基C,图谱显示为缺失位点后双峰图像,其余位点未见基因突变。其余3位家系成员在该位点未有基因突变。2.50例正常对照组在该基因位点未有基因突变。3.家系中7位患者单克隆测序结果：7位患者均在COL10A1基因三号外显子第2100位点处缺失1个碱基C。4.与数据库中提供基因比对,正常对照组与家系成员均在COL10A1基因三号外显子第2144后多出3个碱基C。结论：1.该家系为Schmid型干骺端软骨发育异常常染色体显性遗传,爷爷为正常人,致病基因由奶奶传代,第二三代患者均为杂合突变。2.该家系7位患者在COL10A1基因第2100位点处缺失一个碱基C,导致框移突变,进而引起X型胶原蛋白的改变,引起长骨干骺端发育异常。与已有的研究相比,目前COL10A1c2100delC的基因突变尚未有报道。3.在COL10A1基因插入CCC考虑可能为不同地区、不同人种的人群基因异质性,而非致病基因突变。