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前列腺癌(prostate cancer,PCa)是危害男性健康的一种严重疾病,对前列腺癌的治疗至今尚无有效手段,传统的放疗、化疗及手术不能解决肿瘤的转移及肿瘤由激素依赖性转向非依赖性的问题。原花青素(procyanidins,PC)是一种多酚类化合物,存在于葡萄籽、山楂、松树皮等天然植物中,有高效的抗氧化、降血压、抗肿瘤、抑制细菌生长等生物学活性,并以其高效、低毒、高生物利用度的特点倍受关注。原花青素对人口腔癌、皮肤癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、胃癌、结肠癌等有一定的预防或治疗作用,而对人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞的作用至今尚无相关报道。所以本论文进行了如下研究: 1.运用噻唑蓝(MTT)比色法测定了原花青素对PC-3细胞生长的抑制作用,结果显示100~300μg/ml原花青素与PC-3细胞作用24~72h,原花青素显著抑制PC-3细胞生长,并呈时间-剂量效应关系。 2.采用倒置显微镜观察、HE染色以及透射电镜观察原花青素对PC-3细胞作用引起的形态学改变。采用不同浓度的原花青素作用PC-3细胞后,倒置显微镜下可见细胞变圆,细胞膜透亮,贴壁能力下降,出现漂浮细胞,表明原花青素使细胞分裂减少,细胞生长受抑制。HE染色后光镜下观察可见细胞皱缩变圆、变小,出现多核细胞,核质比增大,异染色质增多。透射电镜下分析细胞超微结构,经原花青素作用的PC-3细胞可见细胞明显水肿,胞膜不完整,细胞质内有大量空泡,内质网空泡化,核膜水肿,高剂量原花青素作用后可见质膜、核膜破碎,线粒体嵴消失,细胞器外溢。 3.运用流式细胞术,采用PI染色法和Annexin V-FITC/PI双染法,观察不同浓度原花青素诱导PC-3细胞凋亡的作用。PI染色法结果显示,原花青素能将PC-3细胞周期阻滞在G0/G1期;Annexin V-FITC/PI双染结果显示,300μg/ml原花青素作用6h诱发42.05%PC-3细胞凋亡;300μg/ml原花青素作用24h诱发44.86%的细胞凋亡;300μg/ml原花青素作用48h引起94.37%的细胞坏死,表明原花青素具有诱导PC-3细胞凋亡和坏死的作用。