郑氏推拿干预EIMD模型对MRFs的影响研究

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目的:通过郑氏推拿手法对大鼠运动性骨骼肌损伤(EIMD)模型进行干预,检测生肌因子家族(MRFs)中Myf5、Myod等蛋白表达情况,探讨郑氏推拿手法干预EIMD的疗效及作用机制。方法:将8周龄SPF级SD大鼠72只,随机分为空白组(C组)、模型组(E组)和实验组(T组),每一组又根据时相不同分为0h、12h、24h、48h组,每组6只。将E组与T组进行离心跑台造模,C组与E组不予干预,实验组于造模后即刻、12h、24h、48h分别予以郑氏推拿手法中的“揉法”进行干预,观察大鼠一般情况变化。研究观察大鼠腓肠肌组织HE染色以及电镜中的形态学变化,通过ELISA检测大鼠血清CK-MM浓度变化,Western Blot检测大鼠腓肠肌组织Myf5、Myod蛋白表达情况。结果:1.大体情况观察:C组大鼠情况良好,造模组(E组、T组)大鼠运动能力下降,呼吸不匀,部分四肢轻微肿胀,造模结束后,运动能力稍有恢复,T组恢复情况好于E组。2.组织形态学观察:C组各时相腓肠肌纤维排列整齐,无显著差异。E0、T0组肌原纤维排列紊乱,部分炎性细胞浸润表现。E12、T12炎性细胞浸润表现增加。E24肌原纤维杂乱加剧,T24组炎性细胞减少,部分肌原纤维排列紊乱情况恢复。E48炎性细胞仍较为明显,损伤严重,T48组胶原纤维排列基本恢复,炎性细胞浸润明显减少。3.超微结构观察:C组各时相肌原纤维排列整齐,无明显差异。E0、T0组肌原纤维排列紊乱,部分线粒体肿胀。E12、T12组线粒体肿胀明显,且较前有所加剧。E24肌原纤维紊乱明显,T24线粒体肿胀较前减少,部分肌原纤维排列恢复。E48组肌原纤维溶解,线粒体肿胀,T组肌原纤维基本恢复正常排列。4.CK-MM含量水平:E组、T组大鼠血清CK-MM浓度水平均于造模后即刻达到峰值,随时间延长,逐渐下降,到48h基本接近C组水平,T组相较E组下降明显。各组大鼠相同时相比较,E组较T组大鼠血清CK-MM浓度均明显升高,具有极显著性差异(P<0.05)。5.Western Blot检测结果:(1)Myf5表达情况:与C组同等时相相比,E组除0h时相外,其余时相大鼠腓肠肌组织中Myf5蛋白表达显著升高,具有极显著的统计学意义(P<0.01);与C组同等时相相比,T组各时相大鼠腓肠肌组织中Myf5蛋白表达明显升高,具有极显著的差异(P<0.05);与E组同等时相相比,T组各时相大鼠腓肠肌组织中Myf5蛋白表达均升高,具有显著性差异(P<0.05)。(2)Myod表达情况:与C组同等时相相比,E组0h时相大鼠腓肠肌组织中Myod蛋白表达未见明显变化,不具有统计学意义(P>0.05),其余时相大鼠腓肠肌组织中Myod蛋白升高,具有显著差异(P<0.01);与C组同等时相相比,T组各时相大鼠腓肠肌组织中Myod蛋白表达明显升高,具有极显著的差异(P<0.05);与E组同等时相相比,T组0h、12h时相大鼠腓肠肌组织中Myod蛋白表达均升高,具有显著性差异(P<0.05),T组24h、48h时相大鼠腓肠肌组织中Myod蛋白表达均升高,具有极显著差异(P<0.01)。结论:(1)郑氏推拿手法中的“揉法”对大鼠腓肠肌损伤的修复具有一定的积极作用。(2)郑氏推拿中的“揉法”可明显上调大鼠腓肠肌组织损伤模型中,生肌因子家族蛋白Myf5、Myod的表达,有效促进Wnt信号通路的激活,从而发挥对运动性骨骼肌损伤的修复作用。(3)Wnt信号通路可能是郑氏推拿手法有效干预大鼠骨骼肌损伤修复的主要通路之一。
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