肝纤维化(hepatic fibrosis)是一切慢性肝病的共同病理学基础，是形成肝硬化的必经病理阶段。肝硬化是我国乃至世界疾病谱中的常见病、多发病，严重危害着人类的健康。研究发现肝纤维化有逆转的可能，若在肝纤维化时期积极治疗，其预后将大大改观。然而到目前为止，国内外尚无理想的抗肝纤维化的药物。中药治疗肝纤维化有着悠久的历史，在治疗肝脏疾病方面具有独到的优势。正交设计是一种高效、快速、经济的多因素试验设计方法。研究发现中药具有良好的免疫调节作用，硒与机体免疫功能密切相关。为此，本研究拟采用正交设计分析中药复方抗纤Ⅰ号方剂的配伍机理，探讨抗纤Ⅰ号方剂和硒对实验性肝纤维化大鼠免疫功能的调节作用。肝纤维化的形成与发展是极其复杂的过程，对其分子机制的研究成为当今国际研究的热点。研究表明多种细胞因子参与肝纤维化的发生。其中，转化生长因子β1（TGF-β1）是目前所知的最强大的促胶原生成因子，在肝纤维化的起始和持续发展中起关键作用，因而成为肝纤维化治疗的重要目标。细胞核因子κB（NF-κB）是细胞中一个重要的转录因子。研究认为NF-κB具有广泛的生物活性，参与调节免疫反应及炎症过程，促进炎性基因及TGF-β1基因的转录。目前中药复方通过下调TGF-β1表达，降低NF-κB与DNA结合活性治疗肝纤维化已有报道，但均较为零散。本研究有机结合整体和离体实验，从基因和蛋白水平探讨抗纤Ⅰ号方剂治疗肝纤维化的效果及其作用的分子机制，为临床治疗提供理论依据。第一部分 抗纤Ⅰ号方剂的配伍机理及优化复方和硒抗大鼠肝纤维化的实验研究目的：探讨抗纤Ⅰ号方剂的配伍机制，比较优化复方和硒抗实验性大鼠肝纤维化的作用。 <WP=5>方法：以SD大鼠皮下注射CCl4、胆固醇饲料等复合因素制造大鼠肝纤维化模型，重复正交设计，6因素（7味中药），2水平（用与不用），按L16(215)正交表组成15个处方，将肝纤维化的大鼠随机分组，用不同处方的中药灌胃6周，检测大鼠血清ALT、ALB、Hyp、HA的含量，筛选出有显著作用的中药。根据中医治疗肝纤维化的治则，将筛选出的中药组成抗纤Ⅱ号和抗纤Ⅲ号（优化复方）。SD大鼠随机分为空白对照组、肝纤维化模型组、模型恢复组、秋水仙碱组、抗纤Ⅰ号组、抗纤Ⅰ号加硒组、抗纤Ⅱ号组、抗纤Ⅱ号加硒组、抗纤Ⅲ号组和抗纤Ⅲ号加硒组，大鼠肝纤维化模型成功后用相应药物灌胃6周，检测各组大鼠肝组织Hyp含量、血清酶（ALT、AST、ALB和GLO）含量、血清肝纤维化指标（HA、LN、PCⅢ和ⅣC）含量、肝脏病理改变，比较优化复方及各方剂加硒的治疗作用。结果：正交试验方差分析显示：丹参(A)用与不用，对降低ALT含量和提高ALB含量有显著性差异（p<0.05）；郁金(C)主要提高ALB含量，降低HA含量（p<0.05）；三棱、莪术(D)重在降低HA含量（p<0.05）；鳖甲(E)的功效主要在于降低肝组织的Hyp含量（p<0.05）。优化复方和硒抗大鼠肝纤维化的检测结果显示：与空白对照组相比，其余各组大鼠血清Hyp、ALT、AST均不同程度升高。各优化复方和硒治疗组的ALT明显低于秋水仙碱组。抗纤Ⅰ号和抗纤Ⅰ号加硒组的Hyp、AST明显低于秋水仙碱组（101.1±38.4，96.8±40.7 vs 152.8±39.8；150.8±34.0，154.6±27.3 vs 215.8±24.6，p<0.05）。抗纤Ⅱ号和抗纤Ⅲ号ALT明显高于抗纤Ⅰ号组（81.9±14.8，77.2±11.6 vs 65.8±11.5，p<0.05）。与空白对照组相比，其余各组大鼠血清HA、LN和PCⅢ均显著升高。各优化复方和硒治疗组HA、LN均显著低于秋水仙碱组。抗纤Ⅱ号和抗纤Ⅲ号HA明显高于抗纤Ⅰ号组（341±84，347±41 vs 228±63，p<0.05）。各组大鼠肝脏病理检查结果：模型恢复组大鼠肝纤维化分级多处于Ⅲ级和Ⅳ级，秋水仙碱组多数处于Ⅱ级和Ⅲ级。各优化复方和硒治疗组大多处于Ⅰ级和Ⅱ级。各优化复方和加硒治疗组与秋水仙碱组相比均有显著性差异(P<0.05)。各方剂与加硒组相比，均未显示出显著性差异。结论：丹参既可显著提高实验性肝纤维化大鼠血清ALB，又可降低血清AST含量；郁金主要提高血清ALB含量、降低血清HA含量；三棱、<WP=6>莪术重在降低血清HA含量；鳖甲的功效主要在于降低肝组织的Hyp含量。抗纤Ⅰ号方剂具有抗肝纤维化的综合优势，ALT、HA检测结果优于抗纤Ⅱ号和抗纤Ⅲ号。第二部分 抗纤Ⅰ号方剂和硒对实验性肝纤维化大鼠免疫功能的调节作用目的：探讨抗纤Ⅰ号方剂和硒对实验性肝纤维化大鼠免疫功能的调节作用。方法：利用CCl4 、胆固醇饲料等复合因素诱导大鼠肝纤维化模型，以秋水仙碱为对照，应用抗纤Ⅰ号、抗纤Ⅰ号加硒进行治疗，检测大鼠脾指数、胸腺指数；采用红细胞免疫功能测定方法检测RBC-C3bR花环率、RBC-IC花环率；流式细胞仪测定大鼠胸腺组织 CD4、CD8含量；MTT法测定大鼠脾脏T淋巴细胞的增殖功能；改良聚乙二醇（PEG）浊度试验测定法测定血清循环免疫复合物含量；MTT法测定大鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。结果：模型组大鼠脾指数（5.47±2.9）显著高于空白对照组（3.28±1.4），胸腺指数（1.15±2.1）显著低于空白对照组（1.69±1.2），抗纤Ⅰ号和抗纤Ⅰ号加硒组胸腺指数显著高于秋水仙碱组（1.52±1.3，1.66?