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背景：发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome, SFTS)是一种以严重发热伴血小板减少为主要特征的新型传染性疾病。其病原体为发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus, SFTSV),这是一种新型的蜱传虫媒病毒。该病毒在我国于2009年在湖北、河南等地首次发现。SFTSV能够引起发热、胃肠道症状、血小板减少和白细胞减少的症状,以及多器官衰竭导致死亡。这种新发传染性疾病平均致死率为12%,局部地区致死率高达30%.该病毒自2009年我国中部地区首次发现以来,在2010年又在我国中部和东北部地区再次频繁出现。由于缺少有效的抗发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的药物和疫苗,因此该病毒仍然对人类的健康存在严重的威胁。目的：本实验通过构建SFTSV小基因组,来研究病毒基因的功能,转录及复制过程。由于SFTSV转录复制所需原件多,本实验还通过构建稳定细胞系的方法来提高转染效率,增加小基因组成功的可能性。由于需要检测质粒转染哺乳动物细胞后的表达情况,我们对SFTSV基因组L、M片段进行了一系列的截短表达,寻找出稳定的蛋白制备抗体,以便对SFTSV各片段的表达进行检测。本实验将反向遗传技术的手段用于该病毒的研究,将为今后药物筛选,疫苗制备的工作打好基础。方法：1.小基因组的构建：构建分别带有SFTSV S, M, L片段5’和3’端UTR区并在中间插入报告基因egfp的重组质粒pcDNA-TP-L、pcDNA-TP-M、pcDNA-TP-S;将重组质粒pcDNA-TP-L、pcDNA-TP-M、pcDNA-TP-S分别与表达NP和RdRp蛋白的重组质粒pcDNA-NP、 pcDNA-L组合转染哺乳动物细胞,通过报告基因egfp的表达水平的差异对小基因组成功与否及效率进行评价。2.稳定表达SFTSV NP蛋白细胞系的筛选：通过G418对293细胞的毒性评估实验,选择合适的G418浓度用于后续细胞系的筛选；将表达SFTSV NP并带有6418抗性基因的重组质粒转染293细胞,以稀释法筛选出稳定表达该蛋白的细胞系；对该细胞系进行鉴定；3.原核表达SFTSV RdRp、Gn、Gc蛋白：设计相应引物,构建各个蛋白的原核表达重组质粒；将阳性重组质粒转化大肠杆菌,小量诱导表达蛋白。结果：1.获得插入报告基因egfp的各重组质粒pcDNA-TP-L、pcDNA-TP-M、pcDNA-TP-S;2.将带有报告基因egfp的各重组质粒与表达表达NP和RdRp蛋白的重组质粒pcDNA-NP、pcDNA-L组合转染哺乳动物细胞,报告基因egfp表达出绿色荧光；3.获得稳定表达SFTSV NP蛋白的293细胞系；4.获得SFTSV结构蛋白的原核表达。结论：发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的小基因组构建初步建立,并且在稳定表达SFTSV NP的细胞系中转染能提高转染效率,SFTSV的结构蛋白可在大肠杆菌中原核表达。