金银花及其近缘种金银忍冬的鉴别研究

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金银花是忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)的干燥花蕾或带初开的花,具有清热解毒,疏散风热之功效,为常用大宗药材之一。在抗击新冠肺炎(COVID-19)期间,金银花起到了重要的作用,价格创2003年非典之后的新高,一度达到280元/公斤。我国有忍冬属植物98种,其中金银忍冬(Lonicera maackii(Rupr.)Maxim.)的花与金银花形态极为相似,少数地区存在金银忍冬代替金银花使用的现象,但金银忍冬的功效尚不明确,如果代替金银花使用不能保证疗效,尤其疫情期间如果使用,会有巨大隐患。目前,金银花和金银忍冬的鉴别研究较少。本文结合了传统和现代技术对二者进行了鉴别研究,结果如下:1.通过对金银花和金银忍冬的性状和粉末特征进行观察。发现在外观性状上,二者长度存在差异,其中金银花长2~3 cm,金银忍冬长1~2 cm。粉末特征中腺毛、花粉粒表面雕文、厚壁非腺毛和薄壁非腺毛存在一定的差异。其中金银忍冬腺毛柄部极短,由1~2个细胞组成,而金银花腺毛柄部较长,且由2~4个细胞组成;金银花薄壁非腺毛长度远大于金银忍冬。2.使用HPLC法对16个不同批次的金银花和金银忍冬进行测定,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)作相似度评价,并以聚类分析法为分析手段对二者进行鉴别。结果建立了不同批次金银花和金银忍冬的HPLC指纹图谱,二者相似度很高在0.972~0.994之间,结合聚类分析识别方法,可实现对金银花与金银忍冬的区分。HPLC指纹图谱准确度高、专属性强,可用于金银花与金银忍冬的鉴别。3.通过选用PCR产物直接测序法测定了6条金银花和金银忍冬的psbA-trn H基因序列,并从GENBANK上下载二者psbA-trn H基因序列7条,使用MEGA7.0对所有序列进行比对、计算种内与种间的遗传距离并构建ML系统聚类树。结果显示金银花和金银忍冬种内最大遗传距离(0.003)远小于种间最小遗传距离(0.105),有明显的条形码间距,同时ML树结果能明显区分二者。psbA-trn H序列可用于金银花和金银忍冬的鉴别。4.收集多批次不同年份、不同产地金银花及金银忍冬,在Super Nose-14电子鼻系统下通过正交试验确定最佳测量条件,然后对样品气味信息进行测量,使用主成分分析法(PCA)、线性判别分析(LDA)对样品气味信息进行分析,分别建立真伪、产地及储藏年份识别模型。结果LDA识别模型可以清晰区分金银花与金银忍冬、金银花不同产地及不同储藏年份的样品。利用金银花的特殊气味运用电子鼻对金银花进行了细致区分,区分效果显著,为今后金银花的鉴别提供了新思路。
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