计算机辅助分析及筛选rhbFGF原核高效表达体系的探索

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利用计算机生物软件DNASIS2.5辅助分析,设计了20条上游引物和1条下游引物,在不改变hbFGF氨基酸序列的前提下,对重组人碱性成纤维细胞生长因子cDNA序列的5’端TIR区域的碱基进行改造。通过PCR定点突变技术,选用大肠杆菌偏好的密码子,适当降低G+C含量,增加标准自由能变化ΔG~0,从而改变mRNA的TIR二级结构,使其更有利于mRNA的翻译表达,并由此构建了非融合rhbFGF重组载体系列pET-JN。将这二十种重组子分别转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,进一步筛选得到16株表达量不等的菌株,其中有绝大部分表达率≥10%,且有5株可溶性rhbFGF的表达较高。随机选取一株rhbFGF表达率约20%并有相当可溶性蛋白表达的菌株进行大规模发酵、纯化。表达产物经SDS-PAGE电泳分析、免疫分析、活性检测,表明与hbFGF具有相同N端氨基酸序列,相同的免疫特性和生物学活性。研究结果说明采用计算机辅助分析对rhbFGF原核高效表达体系的筛选有一定的积极性。
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