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黄曲霉毒素是一类主要由黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的次级代谢产物,具有强毒性和致病性。在食品和饲料中,黄曲霉毒素污染现象非常普遍,这不仅对食品业和农牧业造成了严重经济损失,而且对人类及动物的健康带来巨大的威胁,因此受到了广泛的重视。在前期工作中,我们分离到了能高效降解黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1, AFB1)的菌株——施氏假单胞菌F4(Pseudomonas stutzeriF4),在此基础上,本论文针对F4产生的AFB1降解酶(AFB1-degrading Enzyme, ADE)进行了研究。通过优化发酵条件,提高产酶水平,对ADE分离纯化方法,及其酶学性质进行了研究。主要结果如下：1.以Pseudomonas stutzeri F4的产酶条件进行考察和优化。选择与产酶相关的种龄、接种量、起始pH值、发酵时间以及温度等5个因素,以ADE酶活为评价指标,在单因素试验的基础上,通过三因素三水平的Box-Behnken响应面分析法优化施氏假单胞菌发酵产ADE的条件。结果表明,在接种量和起始pH值分别为3%和6.5时,最优发酵条件理论值为种龄10.5h、发酵时间42.5h、温度30.3℃,在此培养条件下,发酵液的ADE酶活可达到2769U,比优化前提高了29%。2.降解AFB1酶的分离纯化。用55%的硫酸铵沉淀处理,得到粗酶液,用DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱进行纯化后,出现三个洗脱峰,于第三个峰(±132～152min)检测出酶活,且在±144min时相对酶活最大,为55%。然后通过Superdex G-100层析柱进一步纯化,结果出现两个洗脱峰,于第二个峰(±920-1200min)检测出酶活,且在±980min时相对酶活最大,为45%。110mg的ADE原酶液通过55%硫酸铵沉淀、离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化后,ADE纯化了123倍,总蛋白量为0.5mg,酶活为32×103U,比酶活为64×103U/mg,表明其纯化效果良好。3.基于纯化的酶,研究了F4菌株产生的ADE的相关特性。结果显示,ADE相对分子质量约为24kDa,其与AFB1反应的最适温度和pH值分别为30℃和6.0,Cu2+对ADE酶有抑制作用,其他几种金属离子(Mg2+、Zn2+、Mn2+和Fe3+)对其影响不大。最后,利用双倒数作图法测得其表观Km值为5.61×10-5mol/L。